王晓明，戴卫健，余道军，刘宏钱(1.浙江中医药大学医学技术学院，杭州 310030；2.浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院 a. 检验科，b. 输血科，杭州 310006)

高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus，hrHPV)的感染与宫颈癌的发生密切相关。据统计，有近95%的宫颈癌由hrHPV的持续感染导致，而且hrHPV的持续感染是宫颈癌发生发展的必要条件[1-2]。

大多数女性的HPV感染属于短暂的一过性感染，只有10%的感染长期持续[3]。虽然HPV DNA检测的分析灵敏度很高，但其临床特异性较低，导致其在临床诊断中存在一定的局限性[4]。hrHPV感染宿主后的致癌过程需要其自身病毒基因组整合到宿主基因组中，当HPV自身的核酸整合进入宿主的基因组时，其转录水平将大幅度提高，预示着宫颈组织发生异常且在逐步恶化[5]。hrHPV E6/E7 mRNA的检测可对病毒的活动程度和疾病的进程进行监控，这有利于宫颈癌的早期预防和早期治疗，同时也为宫颈疾病提供更为可靠的临床诊断依据[5]。本研究运用多重实时荧光定量PCR技术(multiplex reverse transcript real time PCR, MRT-PCR)建立了一种简便、快速、准确、高效的hrHPV E6/E7 mRNA检测方法，可实现一步法单管检测14种hrHPV E6/E7 mRNA，为临床更有效更特异地筛查宫颈病变提供了可靠的技术手段。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集2019年6—12月于杭州市第一人民医院进行HPV检测并经HPV DNA筛查试剂[人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)]筛查为HPV 14种高危亚型(HPV 16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)阳性的宫颈分泌物标本223例，患者年龄25～79岁。标本采集后于2～8 ℃保存，72 h内进行检测。单纯疱疹病毒Ⅱ型、梅毒螺旋体、解脲支原体、人型支原体阳性分泌物标本、淋病奈瑟菌、白念珠菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等保存菌种均来自杭州市第一人民医院检验科。……