张义浜，陈智峰，马晓英

江苏大学 药学院，江苏 镇江 212013

通过基因工程表达的抗原蛋白类疫苗在免疫机体时，往往还需要额外添加诸如氢氧化铝或MF59等佐剂。已知蛋白类药物可通过脂肪酸修饰，改善蛋白类药物的脂溶性，提高与靶细胞的结合程度，从而延长体内半衰期，降低用药剂量，减少用药频率[1]。同样地，如果将抗原蛋白进行体外脂肪酸修饰，增强抗原蛋白的脂溶性，甚至诱导组装形成复杂的纳米结构，使其不易被体内的蛋白酶所降解破坏，延长体内半衰期，从而提高被免疫细胞识别和吞噬的几率，有望达到减少抗原和佐剂的接种量，降低疫苗副作用发生率等目的。

我们以卵清蛋白（ovalbumin，OVA）为模型抗原，拟采用化学反应实现OVA的棕榈酸化修饰，通过一系列体内外研究，比较OVA经棕榈酸体外修饰前后在理化性质和免疫方面的改变。

1 材料与方法

1.1 材料

卵清蛋白购自合肥博美生物科技有限责任公司；棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯（棕榈酸-NHS）购自萨恩化学技术（上海）有限公司；8-苯胺基-1-萘磺酸铵（ANS）购自梯希爱（上海）化成工业发展有限公司；BCA法蛋白定量试剂盒购于碧云天生物科技公司；其他为国产分析纯试剂。

1.2 OVA的棕榈酸修饰反应

根据OVA（1 mg/mL）（蛋白中的赖氨酸）与棕榈酸-NHS的摩尔比2∶1、1∶1、1∶2分别进行投料反应，在OVA溶液中缓慢滴入棕榈酸-NHS（溶于N，N-二甲基甲酰胺），室温磁力搅拌反应1 h。反应结束后反应液于12 000 r/min离心10 min，各取适量上清和沉淀部分进行SDS-PAGE分析。

1.3 pH对OVA棕榈酸修饰反应的影响

采用pH5～pH8的磷酸盐缓冲液配成OVA溶液，各缓慢滴加棕榈酸-NHS，室温磁力搅拌1 h。……