f101基因3’端非翻译区微小RNA结合位点单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤患者预后的关系

2020-12-25

中国医科大学学报 2020年12期

（河北医科大学第四医院血液科，石家庄 050000）

非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）是全世界第五大最常见癌症相关死亡病因［1］，造成全球约20万的年死亡病例［2］。美国癌症登记处指出，NHL的发病率在过去的几十年中呈倍数增长趋势［3］。NHL是以B或T和NK淋巴细胞单克隆增殖为特点的一组异质性免疫系统肿瘤［4-5］。以往研究［6-8］表明，不同亚型的NHL生存模式不同，而且有不同的预后危险因素。国际预后指数（international prognostic index，IPI）模型1993年被应用于侵袭性NHL患者的预后预测，在IPI模型中临床特征对于预后至关重要［9］。但IPI评分一样的患者也可能显示不同的生存和预后。研究［10］发现遗传因素可以预测NHL的生存和预后。微小RNA（microRNA，miRNA）参与多种生物活动包括发育、分化、凋亡、生存、衰老、翻译抑制，并促进信使RNA的降解和代谢［11-12］。miRNA在肿瘤中扩增或过表达，通过结合靶基因3’端非翻译区（3’ untranslated regions，3’-UTRs）的互补序列沉默靶基因从而促进肿瘤发展［13］。在3’-UTRs靶位点的基因多态性改变miRNA和靶基因之间亲和力，从而影响靶基因的表达并修改致癌作用［14］。然而，迄今为止miRNA相关单核苷酸多态性（miRNA related single nucleotide polymorphism，miRSNPs）和NHL的研究报告很少。本研究中选择f101 rs4901706来评估其对NHL癌症风险和预后的作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2006年1月1日至2015年10月1日于河北医科大学第四医院血液科治疗的258例患者作为病例组。所有患者均来自中国北方地区。其中，男152例，女106例，年龄14～87岁，中位年龄为50岁。将患者按照造血与淋巴组织肿瘤WHO分类：（1）惰性淋巴瘤（50例），包括黏膜相关淋巴组织类型淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤，小淋巴细胞性淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病和T大颗粒淋巴细胞白血病；（2）侵袭性淋巴瘤（165例），包括弥漫型大B细胞淋巴瘤，套细胞淋巴瘤，外周T细胞淋巴瘤，间变性大细胞淋巴瘤，血管免疫母T细胞淋巴瘤；（3）高度侵略性淋巴瘤（32例），包括T和B 淋巴母细胞白血病，鼻腔NK/T细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤。其余11例患者为不明亚型。选取2011年1月1日至2016年1月1日于河北医科大学第四医院健康体检者110例作为对照。本研究获得河北医科大学第四医院伦理委员会批准（2016MEC066），所有参与者均知情同意。

1.2 DNA提取和f101基因分型

基因组DNA应用向导基因组DNA提取工具提取。miRNA结合位点f101（rs4901706）的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）应用连接酶检测反应方法进行基因分型。引物序列为F：5’-AA ACTAAGTCATCTCCCAGATA-3’；R：5’-GTCATCTG GTGAAAGACTGGA-3’。扩增DNA片段根据NCBI数据库（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/snp）。聚合酶链反应应用PCR混合试剂盒按照制造商的说明进行（Promega）。DNA产品应用ABI 3730XL基因分析仪分离。连接用探针为S1（5’-TTTTTTTTTTAATGGGG TATTCAGTGACTAAGA-3’），S2（5’-TTTTTTTTTTTT TAATGGGGTATTCAGTGACTAAGG-3’），S3（5’-TCT GCTATTTATGCAAAATTCTGTTTTTTTT-3’）。多态性被证实基于rs4901706不同等位基因的长度差异。

1.3 统计学分析

采用SPSS 18.0软件包进行统计分析。应用logrank检验及Kaplan-Meier法计算3年总生存率。多因素生存分析采用Cox比例风险模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 随访结果

258例患者的随访时间为10～36个月，随访率为100%。期间169例患者死亡，死亡原因分别为疾病进展（121例）、感染（25例）、出血（9例）和其他（14例）。3年生存率为34.5%（89/258）。

2.2 临床病理特征与NHL患者生存率之间的关系

单因素分析结果显示，B细胞型患者高于T细胞型患者（P=0.005）；骨髓非浸润患者高于骨髓浸润患者（P=0.001）；无B症状患者高于有B症状患者（P=0.001）；乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）水平正常患者高于LDH水平偏高患者（P＜0.001）；肿瘤惰性患者高于侵袭性和高度侵袭性患者（P均＜0.05），肿瘤侵袭性患者高于高度侵袭性患者（P=0.023）；Ann Arbor分期为Ⅰ、Ⅱ期的患者高于分期为Ⅲ、Ⅳ期的患者（P＜0.001）；原发部位为结外和淋巴结的患者高于原发病为白血病的患者（P＜0.001）；IPI评分为低危的患者高于低中危、中高危和高危的患者（P均＜0.05）；T细胞亚型为AA型的患者高于AG/GG型患者（P=0.025），见表1。

2.3 f101基因型的分布及其与NHL患者生存率之间的关系

f101基因型与NHL患者临床特征（Ann Arbor分期、LDH水平、IPI评分、肿瘤侵袭性）的相关性通过χ2检验进行评估，未发现相关性，见表2。f101基因型为AA型的患者27例（10.5%），AG/GG基因型的患者为231例（89.5%）。f101基因型为AA型患者的3年生存率高于基因型为AG/GG型的患者（P=0.017），见图1。

2.4 NHL患者f101基因型及临床病理特征与患者生存率之间的关系

将上述单因素纳入多因素Cox比例风险回归模型分析显示，f101AG/GG基因型可作为NHL患者的独立预后指标，与患者的生存率（RR：1.768，95%CI：1.045～2.997，P=0.035）密切相关；同时患者的年龄、侵袭性、原发部位和IPI评分也与患者生存率密切相关（P＜0.05），见表3。

表1 单因素分析NHL患者的临床特点与生存率相关性Tab.1 Univariate analysis of the correlation between clinical features and survival rate in NHL patients

3 讨论

本研究对258例NHL患者选择f101基因rs4901706位点的miR-SNP进行分析，评估其与NHL癌症风险和预后的相关性。结果发现rs4901706基因多态性与NHL癌症风险无关。f101rs4901706AA基因型患者的生存时间比AG/GG基因型更长。多因素分析表明，f101rs4901706AA基因型是NHL生存的一个独立预后变量。结果同样适用于TCL亚组。

miRNA途径已成为调控肿瘤发生的关键系统。miRNA途径相关的SNP，被称为miR-SNPs，依据其位置以不同的方式调节miRNA的功能，可以直接影响miRNA的表达水平或影响miRNA与目标的相互作用［15］。研究miR-SNPs可以打开新的癌症生物学和临床肿瘤学研究领域，尤其是在危险分层、对治疗的反应等［16］。BRADSHAW等［17］首次报道MIR143中的miRSNP与高加索人的NHL风险降低相关。PECKHAM-GREGORY等［18］研究表明，一些miRNASNP与AIDS-NHL风险有关，并可能调节miRNA的表达。FU等［19］发现miR-618参与滤泡性淋巴瘤的发生，确定miR-618是滤泡性淋巴瘤的潜在危险生物标志物，并阐明了miR-618调控的淋巴瘤发生途径。本研究评估rs4901706SNP对NHL癌症风险的预测能力，结果显示两者没有关联。YU等［20］使用许多类型的

癌症作为一个整体研究对象，确定rs4901706SNP与癌症风险有关，说明miRSNP癌症风险相关性趋势可能存在于某些特定的癌症患者。研究发现rs4901706的等位基因A与某些特定癌症风险相关，而本课题组前期研究发现该等位基因A提示NHL患者预后良好，说明参与NHL病因的miRNA-SNP未必影响患者预后，而影响预后的miRNA-SNP 未必参与其中。