miR-30b和miR-30d对胎盘滋养层细胞HTR8/SVneo迁移能力的影响
2020-11-19仲玉霞
仲玉霞
子痫前期(preeclampsia,PE)是常见的妊娠相关疾病,全球发病率为3%~5%[1]。PE发病机制目前尚不完全明确,有研究认为其与胎盘滋养层细胞的增殖凋亡异常、浸润能力不足等相关[2]。miRNA是指非编码的小分子RNA,在多种生理过程中发挥重要作用,且多种miRNA的异常表达可能与PE的发病相关[3]。 miR-30b 和 miR-30d 是 miR-30 的家族成员,研究发现二者在小鼠PE胎盘组织中表达异常,可能与PE的发病有关[4]。笔者检测miR-30b和miR-30d在人胎盘组织中的表达及其在胎盘滋养层细胞中的含量,并通过干预其表达,分析其对滋养层细胞迁移能力的影响。
1 材料与方法
1.1 样本收集 选取2016年6月—2018年1月在笔者所在医院分娩的10例子痫前期产妇为PE组,年龄(29.7±3.9)岁。 纳入标准:(1)符合 PE 诊断标准;(2)分娩孕周≥28 周;(3)单胎;(4)无原发性糖尿病、高血压、冠心病等内外科并发症。PE组排除标准:(1)排除自发性流产或宫内死胎;(2)胎儿先天性疾病,染色体异常;(3)通过辅助生殖技术而怀孕。10例正常足月分娩的产妇作为对照组,年龄(29.4±3.8)岁;两组产妇均对该研究知情同意,且研究通过医院伦理委员会批准同意。收集两组产妇分娩后的胎盘组织:胎盘娩出15 min内剪取胎盘母体面中央近脐带根部胎盘组织4 cm3,避开坏死部位、钙化点等部位,清洗后立即放置于液氮中,-80℃冰箱保存,用于批量检测。
1.2 细胞及主要试剂 人永生化滋养层细胞系HTR8/SVneo购自上海生命科学院细胞库,10%胎牛血清, 青霉素 (100 μg/ml), 链霉素 (100 μg/ml),RPMI1640(100 μg/ml)培养基购自生物工程(上海)股份有限公司。miR-30b mimic、miR-30b mimic对照质粒 (mimic-NC),miR-30d inhibitor、miR-30d inhibitor对照质粒(inhibitor-NC)购自 Genecopoeia公司。
1.3 PCR检测miR-30b和miR-30d在胎盘组织中的表达 采用RT-PCR检测胎盘组织中miR-30b和miR-30d的表达。……
