王 霞， 欧阳艳艳， 王 晶， 王尚君， 董莲华

(1.中国计量科学研究院，北京 100029；2.南京市计量监督检测院，江苏 南京 210049)

1 引 言

基因测序技术和产业始于1990年启动的人类基因组计划[1]，是被全球生物科技界公认的对人类健康事业影响深远的基础性技术和效益外溢性极强的产业。基因序列测量的准确性直接关系到人们对于生命活动的判断，例如癌症诊断[2～4]、无创产前诊断[5]等。高通量测序技术(high-throughput sequencing)又称下一代测序技术(next generation sequencing technology, NGS technology)，以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志[6]，使得对一个物种的基因组深度测序变得方便易行。

目前市场主流NGS测序仪包括Illumina和Life Technologies公司的测序平台[7,8]，这2大测序平台文库的定量分析和质量评价对于获得高质量的核酸测序数据十分关键。如果过高的估计测序文库拷贝数，将不能获得足够的测序数据，导致降低数据产出；如果过低的估计测序文库拷贝数，将产生低质量的测序数据，甚至会导致测序失败。因此，要控制NGS测序文库的载入量，保证测序数据的质量，就需要在测序前对DNA测序文库进行定量质量控制。此外，为减少NGS运行成本，往往需要将不同测序文库等摩尔量合并为一份测序样品同时测序，这也以测序文库的准确定量分析为前提，这样才能保证不同文库的测序数据的可靠性。

因此本研究以主流的Illumina高通量平台为对象，开展DNA文库定量质量控制技术研究，建立了DNA文库绝对定量数字PCR方法，可用于DNA文库定量标准物质的定值。……