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肉制品中瘦肉精的检测技术研究

2020-10-21陈明星李静

科学导报·学术 2020年5期
关键词:瘦肉精免疫气相色谱

陈明星 李静

摘 要:瘦肉精是一类能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的动物用药。不法分子为了促进家畜生长和提高瘦肉率将瘦肉精添加于饲料中,食用了含瘦肉精的动物组织会产生严重的毒副作用。作者综述了瘦肉精的危害以及肉制品中瘦肉精检测方法研究的进展。

关键词:瘦肉精;检测;气相色谱;免疫

瘦肉精,学名盐酸克伦特罗(Clenbuterol,简称CL),其化学结构和理化性质与肾上腺素相似,是一种β-兴奋剂。临床上用于治疗支气管哮喘和痉挛等,养殖业上主要用于提高动物的胴体瘦肉率,国外也用于减肥。但是CL具有很高的残留性,可引起急性中毒和慢性中毒。世界各国严禁CL用于禽畜的养殖,但因利润驱使,仍存在非法使用情况,严重威胁人类的健康。

由于瘦肉精主要残留于动物内脏中,而西方国家一般不消费动物内脏,在合理控制添加量的前提下,其残留量及其对人体的影响有限,故而在美国、加拿大、新西兰及我国香港等地区,瘦肉精这类物质的使用是合法的。在我国大陆地区,从国民的饮食习惯和我国具体国情出发,中国农业部早在 1997 年 3 月就发布了农牧发 [1997] 3 号令严禁 β- 肾上腺素能激动剂在动物生产中的应用,而香港地区对克伦特罗的最大残留量规定为小于10 μg/kg(2001.146号法律公告)

1 瘦肉精的检测方法

1.1 高效液相色谱法

Fredy Morales-Trejo采用高效液相色谱法(HPLC)对牛肝脏中的盐酸克伦特罗进行测定,检出限为 0.42 ng/g,相对偏差<4.74%,该法快速、准确、重复性高,可操作性强,可用于动物肝脏中克伦特罗残留的测定。Pilar Gonzalez Gigosos采用高效液相色谱法对动物视网膜中的盐酸克伦特罗进行了检测,检出限为0.5 ng/g,该法准确、快速。

1.2 气相色谱法

吴银良等用有机混合溶剂来提取动物肝组织样品,條件是碱性环境,提取液先浓缩,然后用乙酸乙酯溶解,再用稀HCl反萃取,达到除去脂肪的目的,调节pH值之后用SCX固相萃取柱来净化,洗脱液先用氮气吹干,再用双三甲基硅基三氟乙酰氨衍生,采用外标法来定量,选择离子模式进行测定。盐酸克伦特罗的检出限是0.30g/kg,添加浓度1.0~5.0ng/kg,回收率77.4%~88.3%,相对标准偏差3.1%~5.1%,衍生物的峰面积与被测物的浓度在 0.003~1.00mg/L 范围内呈现良好的线性关系,线性回归系数大于0.999。

1.3 胶体金免疫法

姜艳彬等以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸,它能快速、简便地检测出猪尿中的盐酸克伦特罗,如待测尿样中无盐酸克伦特罗,金标抗体便能与固相载体结合,形成红色带,如待测尿样中含盐酸克伦特罗,它与金标抗体一样可以和固相载体结合,占去了金标抗体和固相载体结合的可能性,导致金标抗体和固相载体结合量大大减少,形成不了红色带;经试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2ng/mL的试纸条,可在8min内完成测试,肉眼便可判断,试纸条使用不需任何的仪器设备,能在现场快速检测和筛选,灵敏度满足临床使用要求。

1.4 酶联免疫法

ELISA法检测“瘦肉精”是目前国内普遍使用的检测方法之一。其原理是利用抗原抗体反应:加入特定的“瘦肉精”抗体之后,它会与捕获抗体结合,如果样品中有 -兴奋剂,将与特定“瘦肉精”的酶连接物相互竞争捕获抗体的连接位点,在洗板过程中,没有连接的酶连接物会被除去,加入标准品、样品溶液、酶连接物之后,经过孵育、洗板,将底物(发色剂)转变为蓝色的产物,加入终止液后,颜色从蓝色变为黄色。显示的颜色越浅,“瘦肉精”含量越高,测量在450nm 处进行,样品中-兴奋剂的浓度与吸光度成反比。

1.5 综合化学法

根据“瘦肉精”的化学结构与性质进行综合鉴别主要是参照国家药典标准方法。由于“瘦肉精”溶于水、乙醇,可以用水对其进行提取。“瘦肉精”可以显示芳香第一胺类、氯化物的鉴别反应,用分光光度计检测,最大吸收波长244~295nm。综合分析能定性确定肉制品中是否存在“瘦肉精”类物质,它不需要昂贵的试剂、仪器,操作简单,没有复杂处理过程,是基层动物检疫工作者初查“瘦肉精”类物质残留的有效方法,但灵敏度和最低检测限不是很理想。

2 展望

当前,造成盐酸克伦特罗屡禁不止的原因之一就是国内外检测方法、手段还不完善,还没有建立宰前(毛、尿液)监测体系和准确、迅速、方便、精确的检测方法,从成本现场检测设备简便基层同步筛选法检测(试纸条法、试剂盒法)优点是操作简单、时间短、成本低,适合在现场进行大量样品的快速筛查,但结果受环境、温度等因素影响大,容易出现“假阳性”,因此试纸条法和试剂盒法检测结果不能直接作为执法依据。确证法检测采用液相色谱-质谱联用仪等大型高精尖仪器设备,优点是灵敏度高、准确性好,结果可作为执法依据,但此类仪器设备非常昂贵,环境要求极高,检测周期较长,不适用于基层和现场检测。因此,国内外检测盐酸克伦特罗等“瘦肉精”药物通行做法是“先筛选后确证”,以确证法的结果作为监管执法的依据,这样既节约了成本,又不会误判。

参考文献

[1] 史建国,邵秀芝.竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究[J].肉类工业,2005,25(8):20-22.

[2] 农业部.动物性食品中兽药最高残留限量[Z].农牧发[1997]7 号.北京:农业部,1997-09-04.

[3] 农业部. 中华人民共和国动物及动物源食品中残留物质监控计划[Z].农牧发[1998]8 号.北京:农业部,1998-05-11.

作者简介:陈明星,男,汉族,副教授,硕士学位,研究方向:食品科学。

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