李 洪 赵永旭 安姝亭

（1云浮力智农业有限公司，广东云浮 527526；2浙江诗华诺倍威生物技术有限公司，浙江杭州 310018）

自2012年以来猪流行性腹泻（PED）一直是猪场仔猪高死亡率的首要因素，目前缺乏有效的疫苗及完善的评估手段。但有资料证实[1]，母源SIgA与仔猪对PEDV感染抵抗力有关，而血液中的中和抗体与其对新生仔猪的保护力作用没有相关性。目前很多集团猪场正在通过IgA监测来评估仔猪PED的免疫状态及调整相关免疫程序。

本试验尝试通过选择不同的PED免疫策略后对母猪初乳及常乳中的IgA抗体消长规律监测及比对，选出最优组合，进一步进行免疫时间、剂量、免疫途径优化，为猪场PED的免疫接种方案调整及PED防控提供参考依据。

1 试验材料与方法

1.1 试验时间、地点

2019年5月至2019年7月，试验在某规模猪场开展。

1.2 试验材料

1.2.1 活苗（经典株）

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒（G5型）三联活疫苗（弱毒华毒株＋弱毒CV777株＋NX株）。

1.2.2 活苗（变异株）

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗（WH-1R株＋AJ1102-R株）。

1.2.3 灭活苗

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（华毒株＋CV777株）。

1.3 试验分组

选取胎次、预产期相近的健康妊娠母猪50头，随机分为A、B、C、D、E 5个组，每组10头母猪。A组母猪产前25 d肌肉注射PED变异株活苗1头份，产前10 d后海穴注射PED灭活苗4 mL；B组产前25 d肌肉注射PED经典株活苗1头份，产前10 d后海穴注射PED灭活苗4 mL；C组母猪产前25 d、产前10 d各后海穴注射PED灭活苗4 mL；D组母猪产前25 d、产前10 d各肌肉注射PED灭活苗4 mL；E组为对照组，该组母猪免疫4 mL PBS。试验的具体分组情况见表1。

表1 试验分组及免疫程序

1.4 采样检测

采集产后1、3、5、7、9、12和15 d的每头试验母猪乳汁，使用韩国安捷（Bionote）猪流行性腹泻IgA抗体检测试剂盒检测IgA水平。

1.5 分娩数据记录与数据处理

记录下各组母猪产仔数据，进行组间差异性比较。用Excel进行初步统计与整理，再用SPSS进行差异性分析。

2 结果

2.1 分娩产仔情况

由表2可知，试验组与对照组的总产仔数、死胎率、畸形率均无显著差异，表明在产前25 d和产前10 d免疫接种PED疫苗对妊娠母猪无明显应激反应，胎儿的生长发育情况均正常。母猪产仔具体情况见表2。

表2 不同免疫组母猪产仔情况统计

2.2 母猪乳汁中PEDV IgA抗体检测

由表3可知，在组间比较上，C组母猪在产后第1 d乳汁中IgA抗体滴度显著高于B、E组，其他各阶段不同免疫组间IgA抗体滴度均无显著差异；组内比较上，B组母猪产后第1 d乳汁中IgA抗体滴度显著低于产后第5、7、15 d，其他各组内不同阶段IgA抗体滴度均无显著差异。

由图1-4、表4-5可知，A、B、C、D组比E组整体的IgA抗体水平高，保护力更好；C、D组的IgA抗体水平优于A、B组；C组的IgA抗体水平在5组中最好。

不同免疫策略产生抗体水平的变化规律不同，A、B、E组母猪在分娩后1～15 d乳汁中IgA抗体水平呈现出由低升高后再下降、升高的波浪曲线；而C、D组母猪在分娩后1～15 d乳汁中IgA抗体水平呈现的是持续稳定的平直线。A组的IgA抗体水平峰值出现在第2、6次采样检测；B组出现在第3次采样检测时；C组出现在第5、6次采样检测时；D组出现在第6次采样检测时；E组出现在第3次采样检测时。

3 分析讨论

产仔情况表明，产前25 d和产前10 d的腹泻苗免疫对妊娠母猪无明显应激反应，胎儿的生长发育情况均正常。

表3 不同免疫组PEDV IgA抗体在450和630 nm双波长的OD值 （±s）

表3 不同免疫组PEDV IgA抗体在450和630 nm双波长的OD值 （±s）

注：同列肩标小写字母不同表示组间差异显著（P＜0.05）；同行肩标大写字母不同表示组内差异显著（P＜0.05）。

t 分娩/d组别1 3 5 7 9 12 15 A 组 2.48±0.32cd 2.92±0.21 2.46±0.29 2.48±0.27 2.72±0.32 2.93±0.19 2.57±0.2 B 组 2.16±0.23acA 2.63±0.19AB 2.97±0.2B 2.92±0.24B 2.63±0.2AB 2.63±0.2AB 2.8±0.23B C 组 2.82±0.22bd 2.73±0.25 2.69±0.25 2.8±0.29 2.92±0.18 2.91±0.27 2.63±0.18 D 组 2.78±0.12cd 2.83±0.19 2.68±0.17 2.76±0.24 2.68±0.26 2.8±0.27 2.78±0.22 E 组 2.15±0.18ac 2.38±0.29 2.77±0.2 2.52±0.25 2.33±0.22 2.38±0.26 2.42±0.26

表4 不同阶段各组母猪IgA检测阳性率 （%）

表5 不同阶段各组母猪IgA检测整齐度 （%）

不同免疫组母猪各阶段的IgA抗体水平均较高，试验组母猪和对照组母猪在分娩后的1～15 d乳汁对仔猪均有保护作用，这可能与试验母猪的免疫背景有关，通过背景调查发现，试验场的腹泻苗免疫程序是普免结合跟胎免疫，免疫记录显示，在试验前半年左右试验母猪进行过腹泻苗的3次免疫，免疫间隔为1个月。

与对照组相比，免疫组的IgA抗体水平更高，表明疫苗免疫后，母猪乳汁能产生保护性PEDV IgA抗体，腹泻苗的免疫对哺乳仔猪抗PEDV是有帮助的。

不同免疫策略IgA抗体水平的变化规律不同，通过免疫组间的比较可得，与注射PED活苗＋PED灭活苗相比，只注射灭活苗的母猪IgA抗体水平更高、更稳定，保护力更好，该试验结果与Paudel等人的试验结果相符[2]。通过分析发现，这可能是由于母猪前期普免的原因使得母猪PED抗体水平很高（参考对照组），此时使用活疫苗免疫相比灭活疫苗更容易受到抗体干扰，因此针对普免2次以上PED疫苗的母猪或1年内感染过PED的母猪，若进行加强免疫更倾向于使用灭活疫苗，以此减少抗体对免疫的干扰。而针对未免疫过PED疫苗或未感染过PED的猪场，由于没有PED抗体的感染，活苗＋死苗的免疫方式更能激发IgA抗体的产生[3]。另外，在只注射灭活苗的组别中，后海穴注射的母猪免疫效果较肌肉注射抗体产生更佳，证明在接种灭活苗时，后海穴注射具有更大的优越性。

综合5组母猪乳汁中PEDV IgA抗体的动态变化规律可得，初乳中的PEDVIgA抗体水平并非最高，母猪乳汁中PEDV IgA抗体水平最高点是在分娩后的5～12 d左右，这可能与母猪胎次、免疫次数、免疫方式及IgA的结构与产生机制等有关。IgG在母猪体内由血清传至初乳中，出生小猪摄入的初乳抗体主要是IgG，但由于IgG只能在出生后24～48 h内通过肠上皮细胞转运，因此母猪分娩2～3 d以后乳汁中的主要抗体变为IgA[4]。

有研究[5]表明，对母猪进行2次口服腹泻活疫苗后，其IgA在整个哺乳期均不会明显下降。本试验结果表明，经产母猪在分娩后的1～15 d PEDV IgA抗体水平均较高，能有效保护仔猪。据此可推断，经产母猪在2次免疫腹泻苗后，能在整个哺乳期保护仔猪免受PEDV的侵袭。

4 结论

通过选择不同的PED免疫策略后对经产母猪初乳及常乳中的IgA抗体消长规律监测及比对，综合产仔指标结果可得，在产前25 d和产前10 d免疫腹泻苗可产生较好的免疫保护，对经产母猪推荐使用后海穴注射，2次免疫灭活苗，保护力更好，保护时间更长，可保护仔猪在整个哺乳期免受PEDV的侵袭。