庄金秋，梅建国，张 颖，董 林，李 峰

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州 256600；2.滨州贝尔凯瑞生物技术有限公司，山东滨州 256600）

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）为圆环病毒科圆环病毒属成员，常见基因型包括PCV1和PCV2。PCV1 无致病性，PCV2 具有致病性。PCV2 是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，多发于5～16 周龄仔猪，死亡率达10%～30%，给养猪业造成严重的经济损失[1-3]。PCV2 包含两个主要的阅读框ORF1 和ORF2：ORF1 编码病毒复制相关蛋白（Rep 蛋白），ORF2编码病毒唯一的核衣壳蛋白（Cap 蛋白）。Cap 蛋白具有较强的免疫原性，适用于血清学检测[4]。由于猪群中的PCV2 混合感染、隐性感染较为普遍，因此筛选实验猪制备单一PCV2 血清抗体较为困难。为了解决这一问题，本试验利用实验室制备好的原核表达的PCV2 Cap 蛋白免疫家兔，制备出兔抗PCV2 Cap 蛋白多克隆抗体，建立了Cap 蛋白效价测定的琼脂扩散试验（AGP）检测方法，为该病的临床检测奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

PCV2 Cap 蛋白，由山东省滨州畜牧兽医研究院生物技术重点实验室制备并鉴定；新西兰大耳白兔，于山东绿都生物科技有限公司实验动物中心购置；弗氏完全佐剂和不完全佐剂、聚乙二醇20000，均购自SIGMA 公司；PCV2 Cap 蛋白IgG抗体PPA-ELISA 检测试剂盒、猪瘟病毒（CSFV）IgG 抗体PPA-ELISA 检测试剂盒、猪细小病毒（PPV）IgG 抗体ELISA 检测试剂盒、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）IgG 抗体PPA-ELISA 检测试剂盒、猪伪狂犬病毒（PRV）IgG 抗体PPAELISA 检测试剂盒、兔瘟病毒（RHDV）IgG 抗体ELISA 检测试剂盒，PCV2、CSFV、PPV、PRRSV、PRV、RHDV病毒抗原，PCV2 标准阳性血清及阴性血清，琼脂糖和琼脂粉，梅花形打孔器（孔径3 mm、孔距5 mm），均由山东绿都生物科技有限公司提供；0.85%生理盐水、0.01 mol/L pH7.2 PBS，自制。……