猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光RT-PCR 检测方法的建立
2020-09-07张宏伟王建华陈本龙麻丽丹
张宏伟,王建华,陈本龙,麻丽丹,宋 喆,蒲 静
(1.西华师范大学生命科学学院,四川南充 637002;2.天津海关,天津 300456;3.丹东海关,辽宁丹东 118002;4.北京海关,北京 100026)
在病毒学分类中,猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)均属于黄病毒科瘟病毒属成员,为单股、正链RNA 病毒,具有相似的基因组结构,其基因组全长约12.3 kb,由5'非编码区(5'UTR)、1 个大的开放阅读框和3'非编码区(3'UTR)组成,编码1 个含有约4 000 个氨基酸的前体多聚蛋白。该前体多聚蛋白在宿主细胞信号肽酶和病毒非结构蛋白的作用下,被加工为病毒的各种结构蛋白和非结构蛋白[1]。
猪瘟(classical swine fever,CSF)是由CSFV引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病,曾给我国养猪业造成很大经济损失[2]。自20 世纪50年代以来,通过实施CSFV 兔化弱毒苗免疫接种,我国CSF 疫情已得到有效控制,发病率和死亡率显著降低,但以非典型、低龄化和散发性为特点的非典型CSF 在各地时有发生[3]。早在1971年,Stewart 等[4]就观察到BVDV 对猪的自然感染现象;1996年,王新平等[5]从我国疑似CSF 病料中检出BVDV。近年来猪的BVDV 感染在我国部分地区猪群中呈散发性、地方性流行态势[6-8]。研究发现,猪感染BVDV 后可产生类似慢性CSF 的临床症状和病理变化,从而干扰CSF 的临床诊断[9]。此外,猪感染BVDV 后产生的BVDV 抗体对CSFV 有一定的抑制作用,会影响CSF 疫苗的免疫效果[9]。因此,了解猪群中的BVDV 感染状况,对于防范猪群BVDV 感染和做好CSF 防制和净化工作具有重要指导意义。
近年来,国内外研究人员根据CSFV 和BVDV 基因组各自的5'端的保守区,已建立了多种单一的检测CSFV 和BVDV 的荧光RT-PCR 方法[10-13],而同时检测猪源临床样本中的CSFV 和BVDV 的双重荧光RT-PCR 检测方法则少见报道。……
