陈 刚

癫痫是由于多种因素引起、反复短暂性发作的大脑神经元高频异常放电，是常见的中枢神经系统疾病。据统计，全球每年新发病人至少70万例，且呈逐年上升趋势，该病严重影响病人生活质量，造成极大的家庭负担与社会负担[1]。目前，西医治疗以长期口服药物为主，副作用频发，且病人无法保证良好的依从性，易反复发作，一旦停药，甚至有加重症状的可能。奥卡西平较传统抗癫痫药物卡马西平具有药效稳定、副作用少、耐受性良好等优势，已广泛用于临床治疗，且长期使用会发现消化系统不适、头痛、头晕等不良反应[2-3]。因此，寻找有效的、病人耐受性好的治疗方法已成为研究热点，传统中医药具有不良反应少、疗效稳定等优势。癫痫在中医学中属于“痫病”，其发病与脾肾阳虚、脉络阻滞密切相关，临床治疗多以温阳解肌、祛邪通络为主[4]。栝蒌桂枝汤是由经典方剂桂枝汤加栝蒌而成，解肌发表舒筋疗效显著，常用于痫病的治疗。本研究探讨栝蒌桂枝汤联合奥卡西平对癫痫病人血清miR-21及miR-222水平的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月—2018年1月我院神经内科收治的325例癫痫病人，采用随机数字表法分为观察组和对照组。观察组163例，男85例，女78例；年龄35～66(50.01±6.11)岁；病程1.3～5.0(3.13±0.71)年；特发性癫痫71例，隐源性癫痫92例。对照组162例,男84例，女78例；年龄34～66(49.98±6.21) 岁；病程1.2～5.0(3.09±0.74)年；特发性癫痫72例，隐源性癫痫90例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核并批准通过，所有病人均签署知情同意且能积极配合至研究结束。

1.2 纳入标准 中医诊断：符合中医痫病标准[5]，①全面发作，发病急骤，猝然倒地，伴四肢抽搐，呼之不应，苏醒后与常人无异；②单纯部分性发作，局部肢体抽搐，但未倒地，可伴周身多汗、言语功能障碍及恶心呕吐等症状，发作数分钟后缓解；③符合痰瘀阻滞、脾肾阳虚证候，主要表现为神疲乏力、腰膝酸软、记忆力下降、懒言少气、纳呆便溏，舌紫暗或淡，苔腻且厚，脉弦涩或弦滑。西医诊断：符合癫痫诊断标准[6]，一过性短暂反复发作；典型异常的脑电图表现可见棘波、综合波或慢波。所有病人病程均在1年以上且既往未正规服用抗癫痫药物。

1.3 排除标准 病人存在精神、认知功能障碍；对研究相关药物过敏者；恶性肿瘤病人；因颅脑外伤、脑血管意外、中枢神经系统感染等引起的症状性癫痫。

1.4 治疗方法 对照组予以奥卡西平片(生产企业：Novartis Pharma Schweiz AG.Switzerland；进口药品注册证号0.15 g：H20080092)治疗，起始剂量每次0.15 g，每日两次，根据病人临床表现逐渐加药，最高剂量不超过每日1.2 g。观察组在对照组基础上给予栝蒌桂枝汤治疗，组方：栝蒌根20 g，炒桂枝9 g，炒白芍9 g，干姜9 g，红枣6 g，甘草 6 g。每日1付，以水煎煮取汁，共200 mL，早晚分服100 mL。两组均治疗3个月。

1.5 观察指标

1.5.1 血清白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)及N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基(N-methyl-D-aspartate receptor 1，NMDAR1)表达水平 分别于治疗前后采用酶联免疫吸附测定血清IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平。

1.5.2 发作次数 记录病人癫痫发作次数，计算平均次数。

1.5.3 中医证候评分 参照《中医证候学》[7]分别于治疗前及治疗后评定两组癫痫发作时伴随症状，包括头晕、头痛、胸闷、疲乏、失眠、记忆困难、抑郁，分值越高提示症状越重。

1.5.4 不良反应 记录所有病人治疗期间不良反应发生情况，包括恶心呕吐、腹痛腹泻、便秘、肝肾损害等。

1.5.5 血清miR-21及miR-222表达水平 分别于治疗前后采集所有病人5 mL静脉血，以10 000 r/min离心血清，将TRIZOL裂解液中每1 mL加入氯仿0.2 mL进行裂解，采用无RNA酶水进行洗涤，再以10 000 r/min离心5 min获得RNA。将混合液于70 ℃下干浴3 min，之后加入M-MLV逆转录酶，并进行冰水浴，待试管内外温度均衡时加入0.5 μL逆转录酶，于37 ℃环境下水浴60 min，常温下静置5 min，待其完全溶解并逆转录合成cDNA。参照β-actin模版，在反应体系中将上游引物、SYBR Green 1染料、dNTP、下游引物加入反应体系并使得其总体积至20 μL后待检，于55 ℃ 2 min、93 ℃ 1 min、93 ℃ 2 min反应条件下循环40次，记录相关数据。

1.6 临床疗效评定 病人症状、体征完全消失或基本消失，且中医证候积分减少≥95%为临床控制；病人症状、体征改善明显，中医证候积分减少70%～<95%为显效；病人症状、体征较前好转，中医证候积分减少30%～<70%为有效；病人症状、体征较前无明显变化甚至进一步加重，中医证候积分减少<30%为无效。总有效=临床控制+显效+有效。

2 结 果

2.1 两组治疗前后血清IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平比较 治疗前，两组血清IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平较治疗前均降低，且观察组低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 两组治疗前后血清IL-6、IL-1β及NMDAR1 表达水平比较(±s) 单位：ng/L

2.2 两组治疗前后癫痫发作次数比较 治疗前，两组癫痫发作次数比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组癫痫发作次数较治疗前减少，且观察组少于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。详见表2。

表2 两组治疗前后癫痫发作次数比较(±s) 单位：次

2.3 两组治疗前后中医证候评分比较 治疗前，两组中医证候评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组中医证候评分较治疗前均降低，且观察组低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。详见表3。

表3 两组治疗前后中医证候评分比较(±s) 单位：分

2.4 两组临床疗效比较 治疗后，观察组总有效率高于对照组，差异有统计学意义(90.2%与77.2%，P<0.01)。详见表4。

表4 两组临床疗效比较

2.5 两组不良反应比较 治疗期间，观察组不良反应总发生率低于对照组，差异有统计学意义(10.4%与20.4%，P<0.05)。详见表5。

表5 两组不良反应比较

2.6 两组治疗前后血清miR-21及miR-222表达水平比较 治疗前，两组血清miR-21及miR-222表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组血清miR-21及miR-222表达水平较治疗前均降低，且观察组低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)。详见表6。

表6 两组治疗前后血清miR-21及miR-222表达水平比较(±s)

3 讨 论

癫痫是大脑功能异常的难治性疾病，以病人无预见性地反复短暂出现运动、感觉、意识功能障碍为主要临床表现，且脑电图检查存在明显异常，其发病率高，对病人健康及生活质量水平造成严重威胁。药物干预是癫痫的主要治疗手段，如苯巴比妥、苯妥英、卡马西平及新型抗癫痫药奥卡西平等，此类药物可降低机体谷氨酸能神经传递作用、改变细胞内传导信号通路，进而达到改善大脑病理代谢、加强生理功能的目的。由于癫痫发病机制复杂，其防治是目前医学难题，药物治疗作用有限，部分病人长期使用出现诸多不良反应[8-10]。

中医学理论体系中癫痫又称“痫病”“羊角风”，《黄帝内经》首次提出此病与七情相关，《素问·奇病论》提出先天因素至关重要，中医学历经多年研究对其发病机制及治疗方法有独到之处[11]。人体在六淫、先天因素、七情过极等多种因素作用下，致痰浊、风阳、瘀血诸邪胶结、郁积于内，一旦出现气机逆乱，即导致清窍受蒙、痫病发作。此病部位在脑，但与五脏相关，尤其是与肝、脾、肾功能有关。脾为后天之本，可生化气血、调畅气机，一旦失于运化，导致痰浊内阻，诱发痫病；肾为先天之本，一旦亏虚导致脑髓失于濡养，使痰邪上逆蒙蔽清窍而致痫；肝为将军之官，性条达，有主藏血、疏泄之功，可理气疏肝、开窍化痰。栝蒌桂枝汤始于《金匮要略》，方中君药为栝蒌根，可润燥养筋、滋养津液、舒筋缓脉，配以散寒止痛、助阳化气、温经通脉的桂枝，加上缓中止痛、养血柔肝、敛阴收汗的白芍，辅以健脾益气的大枣，最后以甘草调和诸药，共奏养营生津、缓痉之急、柔润筋脉、解肌调营之功，对癫痫疗效甚佳[12-14]。尧雪洲等[15]通过对70例病人进行对照分组研究，结果表明栝蒌桂枝汤联合胆星宁痫颗粒对癫痫具有一定的治疗作用。本研究结果显示，观察组将栝蒌桂枝汤与奥卡西平联用，病人癫痫发病次数较对照组减少，中医证候评分降低，临床疗效显著，且不良反应减轻。

癫痫的发病机制尚无统一定论，普遍认为其主要机制是由于离子通道异常、神经递质异常、神经胶质细胞异常、细胞因子功能异常等导致机体中枢神经系统抑制与兴奋机制失衡、神经元过度兴奋、异常放电导致发病，其中谷氨酸作为兴奋性神经递质具有重要作用[16-17]。NMDAR1是机体普遍存在的离子型谷氨酸受体，可调控离子通道，在正常条件下，保持动态平衡，一旦表达过度即产生神经兴奋毒性作用，引起神经元异常放电，癫痫发作。

癫痫发作与细胞因子异常表达密切相关，IL-6、IL-1β可调节神经功能，导致谷氨酸释放，促使癫痫发作。因此，癫痫发作越频繁，病人血清IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平越高。抗癫痫新药奥卡西平通过抑制离子通道，稳定神经元细胞，发挥抑制异常放电作用[18-20]。现代药理学证明，栝蒌桂枝汤方剂中白芍、桂枝等药材均有一定的抗癫痫镇静作用。白芍的有效成分及提取物可减轻神经细胞受损，抑制脑棘波频繁发放，并在癫痫发作时保护神经元；桂枝所含成分对钙离子通道有阻滞作用，可降低海马场电位，抑制突触传递，进而减轻癫痫症状。白芍、桂枝等促使人体中脑和延髓儿茶酚胺、5-羟色胺类物质表达水平增加，抑制活性氧自由基，促使受损的神经功能恢复[21-22]。李茜等[23]通过中药汤剂联合奥卡西平治疗癫痫亦取得较好的临床疗效，病人血清NMDAR1、IL-1β、IL-6表达水平降低。本研究结果显示，观察组IL-6、IL-1β及NMDAR1表达水平较对照组均明显下降。

miRNAs在中枢神经系统异常疾病病变过程中发挥重要作用。miR-222具有调节炎性因子作用，在IL-1β刺激作用下表达增强，调控下游基因转录和翻译改变相关蛋白，使黏附分子、炎性因子表达异常，导致疾病发生。miR-21作为凋亡分子调节miRNAs，机体出现氧自由基大量增加、钙超载时表达明显增强，增加凋亡分子调节作用。癫痫发作与体内炎性因子过度释放、凋亡分子异常表达密切相关，miR-21、miR-222可改变完整的神经元鞘膜，损伤神经元细胞，诱导异常放电，加重癫痫病情[24-26]。Gan等[27]研究发现，miRNA表达水平与癫痫症状呈明显正相关，病人miRNA表达水平越高，症状越重。本研究治疗后，观察组与对照组miR-21、miR-222表达水平均明显下降，观察组通过栝蒌桂枝汤与奥卡西联合使用，效果显著。结合本研究细胞因子表达水平变化，考虑其作用机制可能为治疗后病人血清炎性因子表达水平下降，因此miRNAs对炎性因子的直接调控作用降低，减少脑神经元异常放电，降低病人体内神经毒性因子，具有抗凋亡效应的B淋巴细胞瘤-2基因表达增强，miR-21、miR-222下降，进而减轻癫痫症状[28]。

综上所述，栝蒌桂枝汤联合奥卡西平可提高癫痫病人临床疗效，减少癫痫发作次数，减轻不良反应，抑制血清miR-21及miR-222的表达水平。