在全世界范围内，宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，且近年来呈年轻化趋势[1]。现代医学研究已明确，人乳头瘤病毒（HPV）感染属于宫颈癌及其癌前病变的主要病因[2]。根据HPV 病毒的不同致癌风险，将其分为低危型HPV 与高危型HPV（HRHPV），临床最 常见的HR-HPV 亚型为HPV16 及HPV18[3]。正常人体具备完善的自身免疫系统，大多数女性感染HPV 后经机体自身进行病毒清除，为一过性感染，持续性感染HPV 才可能引发宫颈病变[4]。宫颈癌进展中的3 个关键环节为存在HR-HPV 持续感染、持续感染诱导宫颈上皮不典型增生（CIN）、增生突破机体基底膜形成浸润癌[5]。机体肿瘤免疫主要是细胞免疫，其中以T 细胞的免疫调节、免疫监视为主。T 细胞亚群包含辅助性T 细胞（Th 细胞）、细胞毒性T 细胞（Tc）和调节性T 细胞（Treg），其中Th 细胞中的Th1、Th2 两类淋巴细胞分泌的细胞因子在机体免疫中发挥重要作用，分泌IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 等一系列细胞因子。有研究表明，Th1、Treg 等T 细胞亚群在机体内失衡与宫颈癌的发生和进展有关[6]。本研究旨在探讨阴道灌洗液中IL-6、IL-17、IFN-γ 及TGF-β 检测在宫颈高危型HPV 感染患者中的临床意义，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2018年1月～2019年12月我院收治的84 例宫颈HR-HPV 感染患者为研究组，选择同期来我院体检的84 例健康成年人为对照组。两组年龄、体质指数（BMI）比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

纳入标准：①有HR-HPV 持续感染史者；②年龄＞18 岁者；③有性生活史者；④非月经期者；⑤患者及家属充分知情同意并签署知情同意书。本研究严格遵循赫尔辛基宣言。排除标准：①检查1 周内有阴道用药者；②妊娠期、哺乳期者；③合并原发性心脑血管、肝肾疾病者；④合并非宫颈肿瘤的其他恶性肿瘤者；⑤合并造血功能异常者；⑥合并血液系统疾病者；⑦存在精神疾病者；⑧近半年内使用糖皮质激素、免疫调节剂者；⑨有盆腔放疗史者。

表1 两组患者临床资料比较（±s）

表1 两组患者临床资料比较（±s）

组别 n年龄（岁） BMI（kg/m2）研究组 84 33.85±4.32 23.57±2.51对照组 84 34.02±4.41 23.46±2.64 t 0.252 0.277 P 0.801 0.782

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 嘱患者在取样前72h 禁止性生活，且在取样前1 周内不使用阴道药物，并在患者月经干净后第3 天入院取样。患者自行清洗外阴，取截石位，使用窥阴器撑开阴道，暴露宫颈。取宫颈活检前，使用10ml 生理盐水冲洗宫颈及阴道上1/3处，生理盐水在患者宫颈内停留10s，经后穹隆吸出灌洗液3.0～4.5ml，剔除含有血液的标本，灌洗液取出后室温离心5min，取上清液于-80℃冷冻保存。使用HPV 专用宫颈刷沿顺时针方向刷宫颈5 次，收集患者宫颈口脱落细胞，于-4℃条件下保存。

1.2.2 灌洗液相关细胞因子测定 取出患者灌洗液解冻，恢复室温后，采用酶联免疫吸附试验法检测IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。

1.2.3 HR-HPV 负荷量检测 取宫颈细胞，使用第二代杂交捕获法基因杂交信号放大系统进行检测。

1.2.4 HR-HPV 分型检测 取患者宫颈细胞，使用美国ABI 公司生产的荧光定量PCR 仪检测HR-HPV分型。

1.3 观察指标比较研究组和对照组IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。将研究组患者根据病理组织检查结果分为3 个亚组，宫颈癌患者为A 组（n=27），宫颈上皮不典型增生（CIN）Ⅰ级患者为B组（n=29），CINⅡ、Ⅲ级患者为C 组（n=28）；根据患者HPV 检测分型分为3 个亚组，即HPV16 组（n=31）、HPV18 组（n=30）、其他组（n=23）。比较不同病理结果患者HR-HPV 负荷量，分别比较不同病理结果、不同HPV 分型患者IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平。使用Spearman 法分析IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平与宫颈HR-HPV 感染患者HR-HPV 负荷量的相关性。

1.4 统计学方法采用SPSS 19.0 统计学软件对数据进行分析，计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，采用Spearman 进行相关性分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组和对照组阴道灌洗液中细胞因子比较研究组IL-6、IL-17、TGF-β 水平均高于对照组，IFN-γ 水平低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 研究组和对照组阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

表2 研究组和对照组阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

组别 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β研究组 55.58±8.51 92.76±10.24 31.64±4.21 28.98±5.81对照组 32.21±2.34 30.43±4.36 60.31±10.62 20.32±2.17 t 24.268 51.329 23.001 12.797 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 不同病理结果患者HR-HPV 负荷量比较随着病情加重，HR-HPV＞1 000 拷贝/ml 的患者比例也随之增加，差异有统计学意义（Z=22.040，P=0.001），见表3。

表3 不同病理结果患者HR-HPV 负荷量比较 [n（%），拷贝/ml]

2.3 不同病理结果患者阴道灌洗液中细胞因子比较B、C 组IL-6、IL-17、TGF-β水平均低于A 组，IFN-γ 水平高于A 组（P＜0.05）；C 组IL-6、IL-17、TGF-β 水平均高于B 组，IFN-γ 水平低于B 组（P＜0.05），见表4。

表4 不同病理结果患者阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

表4 不同病理结果患者阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

注：与A 组比较，aP＜0.05；与B 组比较，bP＜0.05

组别 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β A 组（n=27） 66.52±7.64 116.45±12.54 27.14±2.88 31.52±4.63 B 组（n=29） 39.68±4.65a 42.54±5.17a 34.82±3.42a 23.68±3.12a C 组（n=28）58.53±5.39ab 100.53±10.12ab 30.38±2.87ab 27.98±3.86ab

2.4 不同HPV 分型患者阴道灌洗液中细胞因子比较 HPV16 组、HPV18 组、其他组组间IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表5。

表5 不同HPV 分型患者阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

表5 不同HPV 分型患者阴道灌洗液中细胞因子比较 （±s，pg/ml）

组别 IL-6 IL-17 IFN-γ TGF-β HPV16 组（n=31） 54.35±7.11 91.68±12.63 30.57±4.53 28.98±4.51 HPV18 组（n=30） 54.96±7.57 92.84±13.24 29.06±4.67 29.87±4.39其他组（n=23） 55.49±7.69 92.67±12.59 30.86±4.42 28.45±4.27

2.5 相关性分析经Spearman 相关性分析，HR-HPV 感染患者阴道灌洗液中细胞因子IL-6、IL-17、TGF-β 水平与HR-HPV 负荷量呈正相关（r=0.613、0.517、0.512，P＜0.05），IFN-γ 水平与HR-HPV 负荷量呈负相关（r=-0.557，P＜0.05）。

3 讨论

宫颈癌属于感染性疾病，主要发病原因为患者持续感染HR-HPV。HPV 是人类癌症发病中唯一确认的致癌性病毒，HPV 感染人体后，使患者宫颈上皮细胞获得较强的增殖活性，可能促使上皮细胞过度增殖而发生癌变[7]。大部分妇女被HPV 感染后的1～2年内能自行清除HPV 病毒，然而人体免疫力不同，部分机体免疫力较差的感染者会出现持续感染，最终可能进展为宫颈癌。有研究证实，HR-HPV 的持续性感染导致机体细胞因子介导的抗肿瘤免疫被抑制，阴道免疫微环境发生紊乱，最终诱发宫颈癌[8]。正常人体受到抗原刺激后，CD4+T 细胞亚群开始进行增殖分化，分泌各类细胞因子，参与机体的免疫应答，其中Th1 细胞可产生IFN-γ，Th17 细胞可产生IL-17，Treg 细胞可产生TGF-β，活化T 细胞可产生IL-6。

本研究结果显示，研究组患者阴道灌洗液中细胞因子水平除IFN-γ 外均高于对照组，其原因可能与HR-HPV 感染患者体内存在HR-HPV 病毒，机体发生免疫调控，而持续性感染导致机体免疫失衡有关。段律芳等[9]研究结果显示，HR-HPV 负荷量随患者CIN 级别增加而增加，认为HR-HPV 负荷量增加可能导致宫颈逐渐发生病变。本研究结果中，随着患者病情加重，HR-HPV＞1 000 拷贝/ml的患者比例也随之增加，说明HR-HPV 负荷量越大，患者病情越严重，与之结果一致。

不同病理结果患者阴道灌洗液中细胞因子水平比较显示，宫颈癌患者IL-6、IL-17、TGF-β 水平最高，CIN Ⅱ、Ⅲ级患者其次，CIN Ⅰ级患者最低，IFN-γ 水平则相反。IL-6 属于单链糖蛋白细胞因子，由多种细胞产生，为Th2 细胞相关细胞因子，具有促进T 细胞、B 细胞增殖及分化的功能，参与机体早期炎症反应[10]。IL-17 是Th17 细胞分泌的特征性细胞因子，主要功能为促进机体中性粒细胞聚集、活化，介导促炎症反应的发生[11]。IFN-γ 是水溶性二聚体细胞因子，其主要功能在于激活机体巨噬细胞，进行抗病毒，诱导Th1 细胞分化而抑制Th2细胞分化[12]。IFN-γ 作为干扰素，旨在通过干扰病毒的基因转录及病毒蛋白组分的翻译来清除人体内的病毒，患者阴道灌洗液中IFN-γ 水平降低可能导致机体免疫力降低，而最终导致宫颈癌变的发生。TGF-β 属于生长因子，与肿瘤演变进程存在密切关系，可调控机体细胞增殖、迁移、侵袭、转换[13]。正常情况下，机体Th1/Th2、Treg/Th17 处于动态平衡，以维持机体免疫平衡。

已有研究证实，HPV16、HPV18 属于HPV 高危亚型，70%的宫颈癌患者源于此两类高危亚型[14]。本研究将HR-HPV 感染患者根据HPV 亚型进行分组后，比较患者阴道灌洗液中细胞因子水平，发现阴道灌洗液中细胞因子水平差异不显著，说明HRHPV 病毒类型对患者免疫系统影响差异不大。经Spearman 相关性分析，HR-HPV 感染患者阴道灌洗液中细胞因子IL-6、IL-17、TGF-β 水平与HRHPV 负荷量呈正相关，IFN-γ 水平与HR-HPV 负荷量呈负相关，说明HPV 感染可能导致患者免疫功能受损，机体更易被病毒侵袭。陈志芳等[15]研究亦证实，宫颈HR-HPV 感染患者IL-6、IL-17、TGF-β水平与患者HR-HPV 负荷量存在相关性。

综上所述，联合检测HR-HPV 感染患者阴道灌洗液中IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β 水平有助于评估患者HPV 感染情况，且上述因子与HR-HPV负荷量有一定的相关性。但本研究样本量较小，有待于扩大样本量进行进一步研究。