王建伟　赵莉　田圃

摘 要 基于“自上而下”的序列分析策略，采用高分辨串联质谱法对德谷胰岛素的氨基酸序列及B链C末端侧链非蛋白修饰序列进行了全面的分析。优化了德谷胰岛素的还原条件及串联质谱的碰撞条件，结果表明，联合使用50 mmol/L三（2-羧乙基）膦及6 mol/L盐酸胍，在45℃下反应40 min即可充分还原德谷胰岛素为两条独立的肽链;还原产物经Accucore C18色谱柱分离，采用静电场轨道阱高分辨串联质谱分析，当高能碰撞诱导裂解能量分别为20（A链）与25（B链）时，可获得最丰富的质谱碎片信息，可满足生物技术药物质量评价中100%的序列覆盖率的基本要求，亦可对问题样品提供更全面的序列解析。此方法未使用传统序列分析中昂贵且费时的测序级蛋白内切酶，降低了引入人为修改的风险，以更准确地获得序列信息，节约了成本，并显著提高了工作效率，为胰岛素类似物的序列分析提供了新的解决方案。

关键词 超高效液相色谱-高分辨串联质谱; 高能碰撞诱导裂解; 德谷胰岛素; “自上而下”序列分析; 序列覆盖率

1 引 言

自从1982年第一个重组生物技术产品即人胰岛素诞生以来，包括治疗性蛋白质在内的生物技术药物（Biotechnology medicine）取得了飞速的发展。 近十年来，生物技术药物在一些疾病治疗方面显示出明显的优势， 出现了一大批明星药物[1，2]。不同于传统的小分子化学药物，生物技术药物一般具有分子量大、结构复杂、稳定性差、批间差异大等特点，因此其质量控制比化学药物更复杂，需要一系列涵盖不同分析领域的分析技术，才能有效地表征其理化属性[3]。……