储健　贾添元　拱忠影　董晨影　周大炜

摘 要 大肠杆菌O抗原寡糖单位生物合成路径的研究对于阐明特异性O抗原在细菌生长和致病中所发挥的作用具有重要意义。本研究利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术研究了大肠杆菌O77 O抗原寡糖单位的生物合成路径，考察了两个甘露糖糖基转移酶（WbaD 和WbaC）在大肠杆菌O77 O抗原寡糖单位生物合成过程中的作用，建立了高效、灵敏的细菌 O抗原寡糖重复单位生物合成路径初步表征方法。首先采用MALDI-TOF MS技术，在负离子模式下，监测WbaD 和WbaC酶促反应产物-脂寡糖形成，初步探索了WbaD 和WbaC的作用方式，应用碰撞诱导解離 （CID）技术对酶促反应产物-脂寡糖的化学结构进行了初步表征。结果表明，WbaD 和WbaC是O77 O-寡糖重复单位合成所需的仅有的两个糖基转移酶，WbaD与O77的O抗原中d-Man-d-GlcNAc糖键的形成相关，WbaC与O77的O抗原中其余两个d-Man-d-Man糖键的形成相关; WbaD 和WbaC之间同时存在协同合作和交替作用方式。本研究建立的细菌 O抗原寡糖重复单位生物合成路径高效表征方法为深入探索细菌O抗原生物合成机制和应用生物工程技术大规模合成功能性糖链奠定了实验基础。

关键词 O抗原寡糖重复单位; 酯寡糖; 生物合成路径; 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱

1 引 言

某些致病菌株可以引起人、畜、禽、兽共患的传染性疾病，在人群密集和卫生条件较差的区域爆发的潜在可能性较大， 特别是近年来，耐多药和广泛耐药菌株的出现，迫切需要寻找新药物及药物作用靶点。……