张亚锋，荀 英，孙 晓△，李 荣，单 敏，陈玉龙

（1. 陕西省西安市食品药品检验所，陕西 西安 710054； 2. 陕西省渭南市中医医院，陕西 渭南 714000；

3. 陕西省药品技术审核查验中心，陕西 西安 710065）

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill. 的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》。作为药食同源的传统中药材，五味子含有多种化学成分，有益气敛肺、解毒保肝、生津止渴、滋肾涩精、宁心安神、抗菌、抗炎、抗氧化、免疫调节等功效，临床常用于治疗肺炎、肝病、心脏病、失眠等且五味子多糖具有较好的免疫促进和抑瘤作用［1-9］。五味子颗粒是五味子加水煎煮2 次后浓缩加入辅料，制成颗粒所得。五味子糖浆是五味子粗粉，用30%乙醇浸渍72 h 后，渗漉加入辅料所得。2015年版《中国药典（一部）》收录的含量测定项，五味子、五味子颗粒、五味子糖浆的含量测定指标均为五味子典型成分五味子醇甲。基于此指标分析，抽查的30 批次样品均符合规定，但成品状态、工艺、剂型均不同［10］，会导致三者间木质素类成分有差异。本研究中采用多组分峰面积比较法评价五味子药材及其单味制剂中木质素类成分相对含量的差异，即以样品中某一典型成分（五味子醇甲为内标物），以其响应面积作为1，计算其余成分（五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素）响应面积的相对比例，进而比较不同工艺产品间的差异。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UltiMate 3000 型高效液相色谱仪（Chromeleon 7.2工作站，UV 检测器，Thermo Fisher Scientific）；ME204E型电子分析天平（精度为万分之一），MS105 型电子分析天平（精度为十万分之一），均购自德国Mettler-Toledo 公司；KQ700VDB 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为700 W，频率为45 kHz）。

1.2 试药

五味子醇甲对照品（批号为110857-201010），五味子酯甲对照品（批号为110857-201714），五味子甲素对照品（批号为110764-201010），五味子乙素对照品（批号为110765-200710），均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，Fisher）；水为超纯水（实验室自制）；五味子药材、五味子颗粒、五味子糖浆均为监督抽样样品，各随机选取10 批次。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：OMNI BOND C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0 ～15 min 时50%A，15 ～25 min 时50%A ～55%A，25 ～30 min 时55%A ～75%A，30 ～38 min 时75%A，38 ～43 min 时75% A ～65% A，43 ～49 min 时 65% A ～50% A）；流 速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测器：紫外检测器；检测波长：217 nm；进样量：10 μL［11-19］。

2.2 溶液制备

分别精密称取1.2 项下各对照品适量，置25 mL 容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液。取五味子药材适量，研细，取0.3 g，精密称定，置100 mL 锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min（功率为250 W，频率为20 kHz），放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得五味子药材供试品溶液。取五味子颗粒适量，研细，取0.9 g，精密称定，按五味子药材供试品溶液制备方法制备五味子颗粒供试品溶液。精密吸取五味子糖浆3 mL，按五味子药材供试品溶液制备方法制备五味子糖浆供试品溶液。

2.3 方法学考察

本研究中对含量测定方法进行了专属性、耐用性、准确度、精密度、重复性、加样回收试验等方法学考察。结果表明，本研究中所采用含量测定方法结果准确、可靠，可用于五味子及其单味制剂中木质素类成分相对差异探究的数据采集处理分析。

2.4 样品含量测定

将对照品溶液，空白溶剂，五味子药材、五味子颗粒、五味子糖浆供试品溶液分别按拟订色谱条件进样测定。色谱图见图1，峰面积见表1 至表3。

图1 高效液相色谱图

2.5 测定结果分析

以样品中五味子醇甲为内标物，以其响应面积作为1，计算五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素响应面积的相对比值，采用SPSS 18.0 统计学软件进行分析，绘制箱型图，详见图2。

3 讨论

3.1 3 种木质素类成分相对比值分析

五味子酯甲在以五味子醇甲为内标物的相对比值分析中，五味子药材高于五味子颗粒，五味子糖浆次之，相对比值中位数依次为0.035，0.029，0.013。五味子甲素在以五味子醇甲为内标物的相对比值分析中，五味子药材高于五味子颗粒，五味子糖浆次之，相对比值中位数依次为0.224，0.165，0.031。五味子乙素在以五味子醇甲为内标物的相对比值分析中，五味子药材高于五味子颗粒，五味子糖浆次之，相对比值中位数依次为0.464，0.330，0.012。

3.2 同一剂型相对差异分析

五味子颗粒采用五味子加水煎煮，水提液浓缩，加乙醇浓缩，添加辅料制粒等工艺步骤，工艺较五味子糖浆更烦琐。结果显示，五味子颗粒中木质素类成分相对比值较五味子糖浆更离散，分析原因可能与五味子药材大小、煎煮溶剂水量、水提液浓缩温度、回收乙醇浓缩温度、制粒方式、颗粒干燥温度等多因素有关［20-23］。

五味子糖浆采用30%乙醇浸渍渗漉、添加辅料的工艺步骤，相比五味子颗粒、五味子糖浆生产工艺更简单、可控。结果显示，五味子糖浆木质素类成分相对比值较五味子颗粒更集中，分析原因发现，五味子糖浆采用粗粉，原料大小均一；渗漉法提取，影响因素更少，从数据离散角度分析，五味子糖浆工艺更稳定、可控。

表1 五味子药材中木质素类成分相对比值测定结果

表2 五味子颗粒中木质素类成分相对比值测定结果

表3 五味子糖浆中木质素类成分相对比值测定结果

3.3 不同剂型相对差异分析

结果显示，五味子颗粒中的五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素相对提取率高于五味子糖浆。分析制剂工艺过程，得出可能与五味子颗粒采用水煎煮提取方法、提取过程剧烈、提取温度高致使木质素类组分的溶解度增大有关，从整体木质素类组分相对提取率角度分析，五味子颗粒工艺提取效果更好。提示大生产时应进行药效学物质提取率和工艺稳定性的综合考量，筛选出更科学、可靠、经济的制剂工艺。

3.4 评价方法选择

本研究中采用的评价方法对药品的评价将不局限于单一组分，更加全面、科学；只需对某一典型成分进行含量测定，后期建立科学、可靠的谱效比例关系后，只需在相同色谱条件下进行峰面积比较即可得出结论；方便快捷，任意一针分析样品色谱图即可计算积分，完成质量评价，更加便捷，极大地避免了人员操作误差（称量误差、定容误差等）和仪器误差（进样量误差等），数据结果更可靠，质量评价更全面。但此方法对提取溶剂、检测波长、色谱分离等要求更严苛，尤其在分析评价处方组成较复杂的复方制剂时更困难。该方法对于评价五味子药材、五味子颗粒和五味子糖浆中多组分相对含量差异与传统方法结果一致，且操作更简单快速，更易避免操作误差，且计算方便。

图2 箱型图