张 丹,卢桂芳,冯 云,刘亚萍,赵 倩,任牡丹,卢新兰,和水祥

(西安交通大学第一附属医院消化内科,西安 710061;*通讯作者,E-mail:dyyyjxk@xjtu.edu.cn)

筛选肿瘤标志物的特异性配体是实现肿瘤靶向诊断以及治疗的重要措施。目前针对肿瘤分子影像的显像方法如PETCT/SPETCT、光学成像、MR和超声等平台的研究已获得重大的突破,但开发获取高灵敏性、特异性、亲和力的分子探针,是这项研究的难点与重点[1,2]。CD44是比较重要的肿瘤标志物,针对该蛋白的靶向药物开发已有报道。CD44v6是CD44中肿瘤特异性、灵敏性均较高的结构域。曾有针对此结构域的单克隆抗体药物进入了临床试验阶段,但因致死性副反应被中断试验[3]。相对于抗体类配体,多肽配体具有更小的分子量,因此免疫原性及毒性也相对较低[1],因此本研究致力于开发此类配体。而目前国内外尚无针对CD44v6的配体多肽报道。

噬菌体展示肽库是获得特异性亲和多肽的高通量筛选方法。本课题组前期使用噬菌体多肽展示技术分别筛选了重组蛋白、细胞、癌组织,结果表明利用细胞、组织筛选的多肽药物具体靶点分子不易明确,蛋白筛选的过程中其高级结构及活性形式难以保持,影响探针的亲和力及特异性[4-7]。而近来出现的纳米磷脂盘技术可以在体外模拟膜蛋白在细胞膜的磷脂双分子层结构中的活性结构[8]。本研究对CD44蛋白进行Nanodisc包被,改良传统噬菌体展示肽库筛选方法,筛选并验证了CD44v6特异性配体多肽序列。

1 材料与方法

1.1 细胞系及主要试剂

人胃癌SGC-7901细胞(中国科学院上海细胞库),人胚肾HEK-293细胞(美国菌种保藏中心)。……