罗婉蓉，刘伯玉，陈 振，任翠平，高 越，杨 莉，朱 禹，余东阳，柳 燕

斑点热是一种由斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsiae，SFGR)感染引起、经蜱虫叮咬传播的人畜共患疾病。目前国际上已证明有19种SFGR对人类有致病性[1]。国内已鉴定的SFGR有5种：R.heilongjiangiensis、CandidatusR.tarasevichiae[2-7]。斑点热的临床表现为发热、皮疹、头痛、局部淋巴结肿大等[1]。病程早期缺乏特异性临床症状，患者往往因为误诊而延误病情，严重时可致死亡[8]。若患者能在早期得到快速准确的诊断，并给予抗菌药物则可以被治愈，减少死亡率。目前，斑点热的实验室诊断技术包括常用但缺乏特异性、敏感性的血清学检测和分子生物学检测。其中巢式PCR与常规PCR比较具有更高的特异性[9-10]，但操作相对繁琐。分离培养斑点热立克次体是确诊最直接、最可靠的依据[11]，但是耗时且有一定技术要求，难以在一般实验室开展。因此，建立快速检测立克次体感染的方法就显得尤为重要。

实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)技术是一种敏感特异的核酸检测方法，可用于病毒、细菌的快速检测[12]。该研究运用qPCR技术，根据SFGR外膜蛋白A基因(outer membrane protein A，ompA)建立SFGR的快速检测方法。

1 材料与方法

1.1 研究对象日本斑点热立克次体(R.janponicaAnhui 120 strain，本实验室分离培养并保存菌种)；其他立克次体属病原体(斑疹伤寒立克次体、恙虫病东方体、无形体)DNA以及常见非立克次体病原菌(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、支原体、螺旋体)DNA。

1.2 试剂及仪器PCR仪(德国Biometra公司)；实时荧光定量PCR仪(瑞士Roche公司)；琼脂糖凝胶成像仪器(上海勤翔科学仪器有限公司)；Nanodrop2000分光光度计(美国ThermoFisher公司)。……