任 杰,武果桃,卫顺生,孟冬霞,闫益波,赵 娟

(山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西太原030032)

骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种带负电荷的多功能非胶原性磷酸化糖蛋白,作为一种可溶性蛋白质存在于大多数体液和组织中，其相对分子质量约为44 kDa[1]。近年来关于OPN的已知功能研究结果如下：(1)通过精氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸组成的序列(RGD)结合于细胞表面,介导细胞、基质之间的相互作用；(2)刺激β细胞产生免疫球蛋白[2]；(3)促进免疫细胞、骨细胞和瘤细胞迁移[3-5]；(4)刺激骨的钙化,改变细胞内钙水平[4]；(5)促进骨组织内磷酸钙的吸收。其中OPN 在骨组织中主要是成骨细胞分泌, 在骨矿化中发挥重要作用,能增强细胞粘附的蛋白质对羟基磷灰石结合能力。而尿结石的形成与骨矿化有许多相似之处，OPN含有与细胞外基质的矿物质表面相互作用的酸性结构域，能抑制培养的血管平滑肌细胞的钙化作用，在体外可抑制草酸钙晶体的成核、生长和聚集[6-7], 但在体内能促进草酸钙结石形成。而舍饲绵羊在育肥中后期大量高蛋白饲料的代谢产物极易蓄积。最终造成尿液离子过饱和与pH值升高，形成磷酸盐结石[8]。本试验观察骨桥蛋白在绵羊磷酸盐尿结石发病情况下在泌尿系统表达量的变化，以及在肾脏和膀胱的定位。从蛋白水平验证骨桥蛋白与绵羊磷酸盐尿结石发生的关系。

图1 肾脏免疫组化(40×)
Fig.1 Immunohistochemistry of kidney(40×)
A:患病绵羊； B:健康绵羊 A: Sicken sheep; B: Healthy sheep

图2 膀胱免疫组化(40×)
Fig.2 Immunohistochemistry of bladder(40×)
A:患病绵羊； B:健康绵羊 A: Sicken sheep; B:Healthy sheep

1 材料与方法

1.1 主要试剂 蛋白提取试剂盒(C510003-0050)；……