刁洪秀,程 楠,张 迪,林德贵

(中国农业大学动物医学院,北京海淀100193)

乳腺肿瘤是犬最常见的自发性肿瘤，尤其是在未绝育的母犬中发病率更高[1-2]。单纯的手术切除治疗无法治愈该疾病，其较高的复发率和转移率使其预后很差。自噬作为肿瘤研究热点，已证实可参与肿瘤发生发展的多个阶段，并诱导异常细胞的凋亡[3-4]。因此，诱导癌细胞自噬为抗肿瘤药物的研发提供了新的方向[5]。伊维菌素(Ivermectin)是一种常用的抗寄生虫药物，近期的研究发现伊维菌素在多种人类肿瘤中发挥抗肿瘤活性[6-8]，但在犬乳腺肿瘤中尚未见到相关报道。本研究旨在探讨伊维菌素对犬乳腺肿瘤细胞的杀伤作用，对细胞凋亡、自噬水平的影响及可能机制，为其在兽医临床肿瘤中的研究和应用提供实验室数据公司。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 犬乳腺肿瘤细胞系CMT 7364(本实验室保存)，CIPp(日本东京大学馈赠)。

1.1.2 药物与试剂 伊维菌素，购自Sigma公司；胎牛血清、胰酶、DMEM培养基，均购自美国Gibco公司；CCK8试剂盒，购自日本东仁公司；annexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测试剂盒，购自BD公司；pEGFP-LC3质粒由中国农事医学科学院军事兽医研究所夏咸柱院士实验室馈赠；转染试剂Lipo3000，购自Invitrogen公司；Anti-β-Tubulin antibody，购自Sigma公司；Anti-LC3B antibody、羊抗兔IgG/HRP及羊抗小鼠IgG/HRP，均购自Proteintech公司。

图3 伊维菌素与犬乳腺肿瘤细胞自噬的关系
Fig.3 The effect of ivermectin on autophagy in canine mammary tumor cells
A：荧光显微镜下pEGFP-LC3蛋白表达(标尺=50 μm)； B：单个细胞内pEGFP-LC3绿色荧光颗粒数
A: The expression of pEGFP-LC3 by fluorescence microscope (Scale bar = 50 μm); B: The amounts of autophagosomes per cell

1.1.3 仪器 Elx酶标仪(Bio Tek)，流式细胞仪(Becton Dickinson Bioscience)，荧光倒置显微镜(OLYMPUS)，细胞培养箱(Thermo)，双人面垂直工作台(苏州净化)，电泳仪(BIO-RAD)，化学发光成像系统(Tannon)。……