刘建林 李惠 牛聪 王文政 胡春艳 陈明亮

（1河南大学第一附属医院肾内科 开封475001；2河南大学基础医学院 开封475004）

糖尿病是一种以高血糖为临床特征的代谢性疾病，多尿、多饮、多食、消瘦是其主要的临床特征[1]。糖尿病合并多种并发症，其中以糖尿病肾病的危害性、严重性最大，糖尿病肾病由于机体长时间处于高血糖状态引起肾血流动力学改变，引发微血管病变，进而导致肾小球硬化，肾脏结构改变，是造成胰岛素依赖性糖尿病（IDDM）患者死亡的主要原因[2]。在血管病变中，炎症为主要影响因素，单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte Chemotactic Protein-1, MCP-1）作为细胞趋化因子，是炎症反应的重要介导细胞因子。 在肾小球的过滤中，由于肾小球基底膜与足细胞相连，使足细胞在其过滤中起到重要的作用[3]。 本研究采用维A 酸对糖尿病肾病大鼠进行治疗，旨在探讨维A 酸对糖尿病肾病大鼠血中MCP-1及尿中足细胞的影响。 现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院提供的健康大鼠20只，随机将其分为对照组和观察组，各10只，另设正常组10只。 年龄2～7周，平均（3.45±2.13）周，体质量150～200g。对照组和正常组采用适量食用油进行灌服， 观察组使用维A 酸（国药准字H10950191）40～80mg/d， 灌服8周， 所有动物都正常进食食用水。 本研究经过我院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 血中MCP-1检测方法 对所有大鼠在实验每周进行血糖测定，在第8周进行股动脉抽血进行MCP-1含量的测定。用酶联免疫吸附法进行MCP-1含量检测。 用鼠尾血进行血糖测定。

1.2.2 尿中足细胞检测方法 在试验结束前1天对所有大鼠的24h 尿液进行收集，根据相关研究方法进行足细胞的测定。使用间接免疫荧光法，进行肾小球足细胞特异性标记蛋白（PCX）的测定[4]。 PCX阳性的细胞为足细胞。

1.3 观察指标 对比各组大鼠血清中MCP-1的变化情况；各组24h 尿蛋白含量；两组大鼠尿液中足细胞及肾小球中位硬化指数；进行相关性分析。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS25.0统计学软件分析。 计量资料以（±s）表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK-q 检验；计数资料以率表示，采用χ2检验，相关性分析采用Pearson 相关性分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠血清中MCP-1的变化情况比较 第8周，对照组和观察组大鼠血清中MCP-1表达水平高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组血清中MCP-1水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；对照组和观察组2周、4周、8周的血糖值比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但均高于正常组（P＜0.05）。 见表1。

表1 各组大鼠血清中MCP-1的变化情况比较（±s）

表1 各组大鼠血清中MCP-1的变化情况比较（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与正常组比较，▲P＜0.05；与观察组比较#P＜0.05；与正常组比较，△P＜0.05。

组别 n 周数 血中MCP-1（pg/ml） 血糖（mmol/L）正常组--3.125±0.044对照组--观察组1010101010101010102482482484.756±0.066#△--3.411±0.111▲5.711±0.5816.112±0.4235.877±0.55130.675±2.341*28.991±3.211*31.542±2.046*30.441±2.415*29.114±3.521*29.667±3.564*

2.2 两组大鼠尿液中足细胞数及肾小球中位硬化指数比较 在同一时间段内，观察组大鼠尿液中足细胞数明显低于对照组， 差异有统计学意义（P＜0.05）；随着时间的进展，尿液中足细胞含量逐渐增多，组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表2。

表2 两组大鼠尿液中足细胞数及肾小球中位硬化指数比较（±s）

表2 两组大鼠尿液中足细胞数及肾小球中位硬化指数比较（±s）

注：与观察组比较， *P＜0.05，△P＜0.05；与第6周比较，#P＜0.05，▲P＜0.05。

组别 n 尿液足细胞数（个/ml）肾小球中位硬化指数6周 12周对照组观察组6周 12周10101.27±0.75△0.33±0.273.11±1.41*#1.55±0.82#0.130.110.54*#0.26▲

2.3 各组24h 尿蛋白含量比较 观察组24h 尿蛋白量为（15.36±2.03）mg/24h，对照组为（33.12±2.77）mg/24h，正常组为（8.01±0.41）mg/24h，对照组24h 尿蛋白测定值明显高于正常组和观察组，差异有统计学意义（P＜0.05）， 观察组明显高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.4 相关性分析 肾小球硬化指数与尿足细胞数呈正相关（r=0.66，P＜0.01））；尿足细胞数与24h 尿蛋白含量为正相关（r=0.52，P＜0.01）。

3 讨论

MCP-1是存在与于核因子-κB（NF-κB）和转录活化蛋白-1（AP-1）的结合位点，与NF-κB 的DNA序列进行结合，进行基因激活的转录[5]。 巨噬细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞等都存在MCP-1。 在糖尿病患者存在高血糖时，蛋白非酶糖化产物、氧化应激、IL-1等都会对MCP-1的表达产生影响， 导致表达上升。 MCP-1在炎症反应中也起着重要的介导作用，由于具有趋化作用，导致单核细胞和中性粒细胞等在循环中使动脉壁启动炎症反应，单核细胞和巨噬细胞相互转换，且会诱导血管平滑肌细胞向内膜下间隙迁移，出现异常增殖导致粥样斑块形成[6]。

足细胞也就是肾小球上皮细胞，是肾小球滤过膜的重要部分。 在出现损伤脱落后，其肾小球内的数量和密度就会出现减少，使肾小球基底膜暴露，出现滤过膜机械障碍，以及电荷屏障功能异常，而慢性肾功能衰竭中糖尿病肾病是引起其发病的常见原因[7～9]。 表明足细胞与糖尿病肾病的发展有着重大关系。 而足细胞的丢失会导致患者出现蛋白尿，而蛋白尿的出现提示病变的出现， 可为糖尿病肾病的病情发展提供可靠的参考指标[10]。本研究结果显示，在第8周，对照组和观察组大鼠血清中MCP-1表达水平明显高于正常组（P＜0.05）；观察组明显低于对照组，（P＜0.05）。 对照组和观察组的血糖值在2周、4周、8周比较差异无统计学意义（P＞0.05），但两组都明显高于正常组（P＜0.05）；在同一时间段内，观察组大鼠尿液中足细胞明显低于对照组（P＜0.05）；随着时间的进展，尿液中足细胞含量逐渐增多（P＜0.05）；对照组24h 尿蛋白含量明显高于正常组和观察组（P＜0.05），观察组高于正常组（P＜0.05）；肾小球硬化指数与尿足细胞数呈正相关（rs=0.66，P＜0.01）， 尿足细胞数与24h 尿蛋白定量为正相关（r=0.52，P＜0.01）。 表明维A 酸可能作为蛋白尿药物存在，对炎症因子的形成也有一定的抑制作用。综上所述， 维A 酸对糖尿病肾病大鼠血中MCP-1表达水平有一定抑制作用，并能改善蛋白尿的产生，提示维A 酸对糖尿病肾病大鼠血中MCP-1及尿中足细胞有较好的影响。