张 弛， 陆俊铭， 周炳刚， 曹相玫

（1.宁夏医科大学第二附属医院，银川 750001； 2.宁夏医科大学基础医学院病理系，银川 750004）

三阴性乳腺癌是根据蛋白质水平的免疫表型特点而划分的一类雌激素受体、孕激素受体、人类表皮生长因子受体阴性的乳腺癌[1-2]，该类型具有高度侵袭性、转移早、易复发、生存期短、病死率较高[3]、易突变抗药的特点。常规药物治疗毒副作用强，对脏器损伤大。心房利钠肽（atrial natriuretic peptide ANP）是参与机体水盐平衡、调节血容量、维持心脑血管系统稳态的内源性激素。有学者已证实ANP 结合细胞膜表面受体后调节第二信使鸟苷酸环化酶参与细胞内多信号途径的生物调控活动，影响肿瘤增殖、分化、凋亡[4]。本研究应用ANP 干预三阴性乳腺癌细胞，观察细胞周期的变化及相关周期蛋白的表达，以进一步阐明ANP 抑制肿瘤的作用和机制，以期为ANP 的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂

人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231 购于上海中乔新舟生物科技公司；ANP（批号CS-01-00605）购于杭州中肽生化公司；0.25%胰蛋白酶消化液（含EDTA）、青链霉素混合液（100×）、SDSPAGE 凝胶制备试剂盒购于北京索莱宝科技公司；高糖型DMEM 培养基购于美国Hyclone 公司；MTT 试剂购于北京索莱宝公司；细胞周期检测试剂盒购于上海贝博生物科技公司；抗体（CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK4）购于中国affinity生物公司。

1.2 实验仪器

CO2细胞培养箱购于新加坡ESCO 公司；低温冷冻离心机购于德国Sigma 公司；C6 型流式细胞仪购于美国BD 公司；超净工作台购于美国Thermo 公司；凝胶化学发光成像系统购于上海勤翔仪器厂。……