孙元杰 国 航 唐 康 马 樱 张春梅

(空军军医大学基础医学院免疫学教研室,西安 710032)

在医学免疫学实验教学中，溶血素参与的溶血实验常作为补体系统中起到重要生物学功能的溶细胞的一个教学实验。国内有教学组用不同动物红细胞制备溶血素，并对溶血实验的效果进行了对比[1,2]。本教研室曾用全细胞加佐剂免疫小鼠的方法，用免疫组织化学方法筛选针对肿瘤相关抗原的抗体，发现全细胞加佐剂组筛选到阳性抗体的比率明显增加。据此，本文尝试用绵羊红细胞(sheep red blood cell，SRBC)加佐剂方法免疫家兔制备溶血素，发现其ELISA效价和溶血效价均明显高于常规SRBC经耳缘静脉免疫组，并在教学实验中取得满意效果。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1主要材料与试剂 酶标板购自康宁公司；酶标仪购自伯乐公司；四甲基联苯胺(TMB)显色剂购自碧云天生物公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG购自Sigma公司。

1.1.2实验动物 实验用动物均由空军军医大学实验动物中心提供。新西兰家兔4只,雌性,体重2～3 kg/只，随机分为A、B两组,每组2只。豚鼠心脏取血分离新鲜血清，将3只豚鼠血清混合作为补体来源。

1.2方法

1.2.1SRBC悬液制备 选用健康绵羊，颈静脉无菌取血，将羊血放入有玻璃珠的无菌三角烧瓶中，同一方向均匀用力摇动，充分混合，去除纤维蛋白,直至血液不会凝固。将抗凝血置离心管中，2 000 r/min，离心5 min，用生理盐水洗涤5次后,配成20%或10% SRBC悬液,置4℃冰箱保存备用。

1.2.2免疫方案 A组(常规耳缘静脉注射组) 首次剂量为每只家兔1 ml 20% SRBC悬液，第2～5次采用10% SRBC，每次间隔6 d，末次注射后第7天取免疫兔血，分离血清检测效价。……