刘函晔 刘卫东 陈正爱 高 歌 延光海 张婧瑶 崔 弘

(延边大学基础医学院,延吉 133002)

近年哮喘的发病率和死亡率在全球范围内呈上升趋势，威胁世界3亿人口，主要特征为持续气道炎症和气道壁重塑体积为上皮细胞脱落、杯状细胞增生、气道平滑肌束增生和肥大、基底膜增厚和血管密度增加等病理变化。变应原反复刺激产生的炎症通过加重气道平滑肌病理变化加重哮喘，与慢性阻塞性肺疾病(COPD)相似，部分哮喘患者由于气道重塑、黏膜及平滑肌增厚引起气流受限导致死亡[1]。

鞘氨醇1-磷酸(sphingosine-1-phosphate，S1P)通过5种G蛋白偶联受体S1P1-5参与细胞增殖、凋亡、淋巴细胞流出、内皮屏障功能、血管生成和炎症等细胞过程。研究表明S1P是肥大细胞的鞘脂代谢产物，诱导肥大细胞活化，肥大细胞激活后脱颗粒并释放生物活性物质，导致哮喘[2]。另外，S1P是淋巴细胞从次级淋巴器官进入体循环的主要调节剂，随着哮喘病程延长，血清S1P水平显著升高[3]。

FTY-720是治疗多发性硬化症的药物，是S1P受体激动剂，可与除S1PR2外的所有S1PRs结合[4]。FTY-720磷酸化后结构与S1P结构相似，与S1P竞争结合S1P1受体，阻断S1P1下游促炎通路，但S1P对哮喘的作用机制尚未明确。本研究以OVA诱导小鼠哮喘模型，探究FTY-720对S1P1的作用及其在哮喘小鼠中的作用及机制。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试剂与仪器 OVA、氢氧化铝混悬液(美国Sigma公司)，IL-4、IL-5、IgE(美国Invitrogen公司),全蛋白提取试剂盒、AB-PAS染色试剂盒(北京索莱宝公司)，S1P1、Wnt1、Phospho-RAC1-S71(美国Santa Cruz公司)，β-actin、P38-MAPK(美国Cell Signaling公司)，FTY-720(美国Cell Signaling公司)；402型超声雾化器(上海四菱医疗器械厂)，RT-2100C酶联免疫检测仪(美国Rayto公司)，电泳仪、Western blot转膜仪和Gel Doc凝胶成像仪(Bio Rad公司)。……