朱茜文 安海燕 张亚平

(平顶山市第二人民医院呼吸内科,平顶山 467000)

肺癌是世界范围内患病率较高的癌症之一，根据肿瘤细胞微观形态， 可分为小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。NSCLC是肺癌最主要的类型，占比超过85%[1]。尽管NSCLC治疗取得了一定进展，但很多NSCLC患者确诊时已是晚期，只有不到18%患者存活超过5年[2]。miRNA是一类短链非编码RNA，通过转录后调控，在细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程中扮演重要角色，在人类疾病中起重要作用，已有研究报道不同miRNA在包括NSCLC在内的各种癌症中起促癌或抑癌的作用，具有作为癌症生物标志物和治疗靶点的应用前景[3-5]。miR-363-3p是近年鉴定出的肿瘤抑制基因，在包括肝癌、乳腺癌、胃癌、直肠结肠癌等诸多癌症中均报道其通过靶向作用于关键基因调控肿瘤生长和转移。文献报道miR-363-3p在肺癌中可通过靶向作用于增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)抑制肿瘤生长，但作用机制尚不明确[6]。本研究通过培养人NSCLC细胞A549，并转染miR-363-3p和磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位(phosphatidylinositol 3-kinase catalytic alpha polypeptide gene,PIK3CA)过表达载体，从细胞水平初步探究NSCLC细胞中miR-363-3p与PIK3CA的调控关系及作用机制。

1 材料与方法

1.1材料 DMEM细胞培养液、胎牛血清购自美国Hyclone公司，lipofectamine 2000购自美国Thermo Fisher公司，青链霉素、Trizol试剂、RIPA试剂、CCK8试剂购自上海碧云天生物技术研究所，BCA试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司，miR-363-3p mimic、阴性对照mimic、PIK3CA重组表达载体(pcDNA 3.1-PIK3CA,pc-PIK3CA)由上海吉玛制药技术有限公司合成，所用引物由上海生工生物公司合成，反转录试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix购自日本Takara公司，荧光素酶报告系统购自美国Promega公司，PIK3CA、E-cadherin、N-cadherin、Cyclin D1蛋白、AKT、p-AKT抗体购自英国Abcam公司。……