王文峰 叶红晖

(日照市中心医院康复医学科，日照 276800)

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesench-ymal stem cells，BMSCs)是具有多向分化潜能、自我更新能力强、低免疫原性的多能干细胞，作为种子细胞广泛应用于再生医学领域[1]。脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是常见严重创伤性疾病，由神经元损伤、轴突髓鞘脱失及神经胶质细胞功能失调引起机体功能障碍[2]。研究显示，BMSCs移植在SCI治疗中具有较好的应用前景，但移植的BMSCs在体内存活率较低及向神经样细胞分化的效率不高[3,4]。电针(electro-acupuncture，EA)是治疗中枢神经系统损伤的常用方法，可用于SCI。研究显示，EA可诱导SCI后运动功能改善，并促进神经干细胞增殖和分化，可提高脊髓损伤干细胞移植的成功率，但具体作用机制尚未明确[5,6]。本研究以SCI模型大鼠为研究对象，探讨EA刺激对SCI后移植的BMSCs存活和分化的影响，为提高干细胞移植对SCI治疗的成功率提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 SPF级4周龄健康雄性SD大鼠10只，体质量80～100 g，10周龄健康雄性SD大鼠60只，体质量390～410 g，均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证编号：SCXK(湘)2016-0002。分笼饲养，自由饮食进水，22～24℃，相对湿度50%～70%，昼夜12/12 h。

1.1.2主要实验试剂 DMEM/F12培养基购自美国Invitrogen公司；Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IGC-001购自美国MedChemExpress公司；异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)荧光标记的CD44和CD90抗体及苯肾上腺素(phenylephrine，PE)荧光标记CD29和CD45抗体均购自美国Becton Dickinson公司；大鼠神经营养素3(neurotro-phin-3，NT-3)ELISA试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；BrdU单克隆抗体、β-catenin单克隆抗体、c-Myc单克隆抗体、cyclin D1单克隆抗体、神经元特异性核蛋白(neuronal nuclei，NeuN)单克隆抗体和GAPDH单克隆抗体均购自美国Cell Signaling Technology公司；……