王 胜 陈永平 吕敬龙 李 颖 刘 林

(重庆医科大学附属第一医院血液科，重庆 400016)

原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis，PMF)是一类慢性骨髓增生性疾病，造血干细胞恶性克隆伴随着继发性的骨髓纤维化和髓外造血[1,2]，其中骨髓纤维化病变通常是由于骨髓成纤维细胞的恶性增殖并产生大量胶原蛋白引起的。PMF发病机制十分复杂[3]，前期研究表明，JAK2(janus kinase 2)和血小板生成素受体(thrombopoietin receptor，MPL)的突变与PMF发病密切相关[4-6]。造血干细胞中持续性激活的JAK/STAT3信号通路会引起巨核细胞(megakaryocyte)异常增殖，并分泌转化生子因子-β(transforming growth factor beta，TGF-β)、血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)和纤维母细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)，其中，TGF-β可以诱发骨髓成纤维细胞的恶性增殖，促进Ⅰ型、Ⅱ型等胶原蛋白的表达和分泌，引起骨髓纤维化及骨硬化[7,8]。但PMF疾病中，是否有其他细胞来源的TGF-β也参与骨髓纤维化进展尚不清楚。

巨噬细胞是一类固有免疫吞噬细胞，在炎症反应中浸润炎症部位，并通过分泌炎症细胞因子如TGF-β、IL-1β和IL-6调控炎症反应的发生，在肝脏、肺纤维化疾病中发挥重要作用[9]，然而其在PMF疾病进展中的功能还缺乏研究。本研究利用小鼠原代骨髓巨噬细胞和骨髓成纤维细胞，发现了巨噬细胞来源的TGF-β可以促进骨髓成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原的表达。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试剂和材料 主要试剂：RPMI1640培养基、胎牛血清(FBS)购自ThermoFisher Scientific；抗TGF-β抗体(1D11)、重组人TGF-β蛋白、重组小鼠M-CSF蛋白购自R&D；TGF-β酶联免疫吸附实验试剂盒购自PeproTech；Ⅰ型胶原酶联免疫吸附实验试剂盒购自Abcam；脂多糖(LPS)、红细胞裂解液、二甲基亚砜(DMSO)、MTT购自Sigma。

1.1.2实验动物 8～12周龄的SPF级C57BL/6雄性小鼠购自北京维通利华公司，小鼠饲养于SPF屏障设施内。……