黄传兵 万 磊 刘 健 刘 磊

(安徽中医药大学第一附属医院，合肥 230031)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种累及多系统的、慢性、侵袭性自身免疫性疾病，四肢小关节受累最常见。滑膜组织血管新生，肥厚绒毛样突起形成血管翳，血管翳侵蚀关节软骨及软骨下骨是造成RA关节功能障碍的最主要原因[1]。RA 关节外表现形式多样，其中血小板活化较为多见[2，3]。血小板活化可发挥凝血、止血作用，但同样参与RA炎症反应等过程。血小板活化后可通过分泌血小板微粒(platelet microparticles，PMPs)参与RA免疫调节、血管新生等过程[4，5]。因此，观察关节炎患者体内血小板活化产物的变化及阐明药物干预机制意义重大。本研究采用弗氏完全佐剂构建佐剂关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型，采用新风胶囊(XFC)干预AA大鼠，观察大鼠体内血小板活化物PMPs及磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phospholipase and tensin homologue，PTEN)/磷脂酰肌醇三激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase,AKT)信号通路等变化，探讨XFC改善AA血小板活化的机制。

1 材料与方法

1.1材料 弗氏完全佐剂(批号:160861206)、PI3K特异性抑制剂LY294002(批号：52-0213)购自美国Sigma公司。Rabbit Antibody PENT、AKT、p-AKT(ser473)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关死亡启动因子(BAD)(Rabbit Antibody)、PI3K(Mouse Antibody)、血小板来源的生长因子(PDGF)购自美国Abcam公司。BX53型显微镜购自日本奥林巴斯公司。XL-ESPIC MCL型流式细胞仪购自美国Beckman-Coulter公司。JEM-1230型透射电子显微镜购自日本日立公司。

1.2方法

1.2.1模型分组 采用随机对照表将大鼠分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组，PI3K阻滞剂LY294002(LY294002)组、XFC组，每组6只。各组分别给予相应药物治疗(NC、MC组给予等体积生理盐水)，给药30 d后观察各项指标变化。

1.2.2流式细胞术检测PMPs标志物 抗凝管腹主动脉采血2 ml。1 000 r/min离心20 min，上清即为富血小板血浆。……