miR-127-3p靶向MAPK4对肝癌HepG2细胞株生物学特性的影响①
2020-07-13张玉蓉贾俊枝徐国明
张玉蓉 贾俊枝 徐国明 郭 红
(内蒙古医科大学附属医院日间病房,呼和浩特 010050)
肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,每年约有63万新肝癌病例产生[1]。在我国,肝癌患者约占总癌症病例的50%,其五年存活率约为5%[2]。现阶段,对肝癌患者多采用手术切除及放、化疗进行治疗,但多因再度复发及转移而预后不良[3]。近年来肝癌发病率逐年递增,探究肝癌生长及转移相关的分子机制成为医学领域研究热点[4]。miR-127-3p是一类抑癌基因,研究表明,在骨肉瘤中,miR-127-3p可显著抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭[5];在骨巨细胞瘤中,miR-127-3p可显著抑制癌细胞集落形成及瘤体形成[6]。而目前在肝癌中还没有关于miR-127-3p作用机制的报道。本研究通过上调miR-127-3p,对其在肝癌细胞HepG2中的作用及机制进行深入探索,为寻找肝癌的有效治疗方法提供新思路。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1细胞株 人正常肝细胞HL-7702、肝癌细胞HepG2购自美国ATCC公司。
1.1.2实验动物 SPF级BALB/c雄性裸鼠20只,鼠龄5~6周,体质量20~22 g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司[SCXK(沪)2017-0005],饲养于内蒙古医科大学新药安全评价研究中心[SYXK(蒙)2014-0003],昼夜12 h交替,经过灭菌处理的水和饲料自由摄取。本实验经内蒙古医科大学医学伦理委员会审批(IACUC 2014045),实验操作遵循3R原则。
1.1.3主要试剂与仪器 DMEM高糖基本培养液(11965-092)、Transwell小室购自美国Corning公司(3379),胎牛血清FBS购自美国Gibco公司(10100154),青链霉素购自北京索莱宝科技有限公司(P1400),Trizol购自美国Invitrogen公司(15596026),反转录试剂盒(4374967)、实时定量PCR试剂盒(10928042)、脂质体2000转染试剂盒(11668019)、荧光素酶检测试剂盒(16177)、pcDNA 3.1载体(V79020)购自美国Thermo fisher公司,RIPA裂解……
