李淑玲 郭明洲 仉子轩 李 闻

(中国人民解放军总医院，解放军医学院，北京 100853)

GW4064是一种已知的胆汁酸核法尼醇X受体(farnesoid X receptor，FXR)的小分子激动剂,FXR受体参与机体的代谢及炎症的调节。FXR不仅在肝脏、肠道和肾脏中表达，在免疫细胞中也同样发现了FXR的表达[1-3]。最新研究发现FXR可抑制NLRP3的激活从而调节NLRP3相关的炎症反应[4]。GW4064通过激活FXR可下调肝脏NF-κB信号的激活，进一步调控肝脏炎症的发生发展[5]。虽然目前有大量的研究显示FXR基因具有抗炎作用，但是对于FXR激动剂GW4064对LPS导致炎症反应的作用及机制有待深入研究；而巨噬细胞是参与炎症反应的主要免疫细胞，巨噬细胞在激活后可产生各种炎症介质。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的一个组成部分，可激活巨噬细胞释放炎症介质，包括一氧化氮(NO)、炎症细胞因子(如IL-1β、TNF-α等)；而NO主要受活化巨噬细胞在炎症状态下iNOS过表达的影响而产生[6]。 因此，本研究主要探讨LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞模型中GW4064对促炎因子的分泌和释放，iNOS表达和NO产生的影响，为GW4064在免疫细胞中的抗炎作用提供进一步的依据。

1 材料与方法

1.1材料 小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株购自北京协和细胞库；GW4064购自Selleck公司；胎牛血清(FBS，10099141)购自Gibco公司；DMEM培养基和双抗(青霉素+链霉素)购自Hyclone公司；二甲基亚砜(DMSO)购自Amresco公司；内毒素(LPS)购自Sigma公司；iNOS抗体、NF-κB抗体、β-actin抗体购自Abcam公司；p-NF-κB抗体购自CST公司；HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)、HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)购自碧云天生物技术有限公司；引物购自华大基因研究中心；逆转录试剂盒购自Invitrogen公司;SYBR Green Realtime PCR Master Mix购自ToYoBo公司；AimPlex流式高通量多因子购自旷博生物科技有限公司。……