史晓敏 毛莉 仇晓霞

1.西北民族大学附属医院/甘肃省第二人民医院，甘肃 兰州730000；2.浙江省舟山医院，浙江 舟山316000

近年来不孕患者逐渐增多，其中女性不孕症较常见，其临床表现为卵子发育成熟及排出障碍。研究表明，某些中药组方对卵巢排卵、助孕、安胎具有较好效果；其中种子汤可通过上调子宫、卵巢等重量，增强机体自身免疫功能，提高受孕率［1-2］。本研究探讨种子汤对不孕大鼠生殖内分泌功能、性激素及EmAb 水平的影响。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物。SPF 级雌性未孕未产SD 大鼠30 只，6～8 周龄，体质量（200±20）g，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（甘）2004-2006-0000449。适应性饲养2 周，自由进食饮水。

1.1.2 试剂。种子汤：白芍、熟地、党参、菟丝子15g，当归、白术、杜仲、续断、鹿角霜12g，黄芪24g，甘草6g（均购自甘肃中医药大学附属医院药房，由药房代煎为终浓度150g/200mL）；右归丸购自北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，国药准字：Z11021040。

丙酸睾丸酮：购自Sigma 公司，批号：H310205241；EmAb 酶联免疫吸附测定法试剂盒，购自江苏科宝生物有限公司；电子天平购自上海恒平有效公司，型号FB224。

1.2 实验方法

1.2.1 模型建立方法。将1.25mg 丙酸睾丸酮溶于0.05mL 的中性茶油中，在大鼠背颈部进行皮下注射；于第15d 后每天进行阴道脱落细胞涂片检查，当大鼠阴道上皮细胞连续11d 持续角化，说明大鼠处于未动情周期，不孕大鼠模型建立成功。

1.2.2 动物分组及处理。从造模后第15d 起开始给予大鼠相应药物灌胃。空白组不做任何处理，模型组给予0.9%的生理盐水；中药复方高剂量组给予种子汤15g/kg，中药复方低剂量组给予种子汤7.5g/kg；阳性对照组给予右归丸4.5g/kg，各6 只。五组大鼠均连续用药4 周期，颈椎脱臼处死。

1.3 观察指标 观察大鼠卵巢及子宫大小，使用电子天平秤进行称重并记录；子宫指数=子宫重量/体重，卵巢指数=卵巢重量/体重。取大鼠腹主动脉血，将其血清分离后，使用全自动生化分析仪（贝克曼，DXI800）测定血清促卵泡生成激素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、雌二醇（E2）水平；采用酶联免疫吸附测定法测定EmAb，检测方法按试剂操作说明书进行，计算阳性/阴性血清比值，若比值超过2.1 且待测血清OD 超过0.4 则判为阳性，反之为阴性。

1.4 统计学方法 用SPSS20.0 软件分析数据，内分泌功能、性激素水平用（±s）表示，各组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q 检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组别内分泌功能的比较 模型组卵巢及子宫指数低于其他各组（P＜0.05）。且种子汤高剂量组高于种子汤低剂量组（均P＜0.05）。见表1。

2.2 不同组别性激素水平的比较 模型组FSH、LH、E2 水平均低于其他各组（P＜0.05），且种子汤高剂量组高于种子汤低剂量组（均P＜0.05）。见表2。

表1 不同组别内分泌功能比较（±s）

表1 不同组别内分泌功能比较（±s）

注：与模型组比较，#P＜0.05；与高剂量组比较，*P＜0.05

组别 卵巢指数 子宫指数空白组 38.41±1.87# 193.72±12.08#模型组 31.82±0.56 149.16±13.92种子汤高剂量组 38.26±1.64# 192.86±12.11#种子汤低剂量组 36.81±1.59#* 184.36±9.28#*右归丸组 37.58±1.67#* 180.74±6.63#*

表2 不同组别性激素水平的比较（±s）

表2 不同组别性激素水平的比较（±s）

注：与模型组比较，#P＜0.05；与高剂量组比较，*P＜0.05

组别 FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） E2（ng/mL）空白组 1.39±0.20# 6.07±1.64# 964.52±118.72#模型组 0.67±0.21 4.72±0.81 573.92±65.24种子汤高剂量组 1.34±0.22# 6.04±1.62# 963.89±117.89#种子汤低剂量组 1.16±0.18#* 5.76±0.94#* 780.19±151.27#*右归丸组 1.12±0.11#* 5.12±0.84#* 759.04±150.03#*

2.3 不同组别EmAb 阳性率比较 模型组EmAb 阳性表达低于其他各组（P＜0.05），且种子汤高剂量组高于种子汤低剂量组和右归丸组（P＜0.05）。见表3。

表3 不同组别EmAb 阳性率比较

3 讨论

研究表明，提高内分泌及EmAb 水平、增强机体的免疫力可以调节下丘脑-垂体-性腺轴的功能，纠正紊乱的内分泌环境及EmAb，改善子宫的受孕环境［3］。文献报道，某些中药复方具有调节卵巢轴和肾上腺轴功能作用，其通过多途径、多环节的综合作用，从而提高了受孕率，带来重大经济和社会效益［4］。本研究显示，种子汤灌胃后的子宫、卵巢表达量显著上调，大鼠卵巢重量比模型组显著增加，提示子宫、卵巢指数间具有一定相关性，说明种子汤能明显提高卵巢组织表达量，提高卵巢对FSH、LH、E2 及EmAb 反应敏感性，表明种子汤能促进不孕模型大鼠的内分泌系统［5］。

近年来，对卵泡发育及卵巢排卵的复杂生理过程有了更深入的了解，其中包括对细胞增殖、分化、卵子成熟至卵泡并破裂、释放卵子及黄体生成等一系列过程。卵泡发育、成熟与促性腺激素存在直接依赖关系，LH 能诱导卵泡细胞生成雄激素，FSH 可促使卵泡旁间质细胞转为卵泡膜并使其增殖，同时使颗粒细胞增殖分化，激活该细胞中芳香化酶系统，将雄激素转为雌激素［6］。肾上腺源于雄激素，通过肾上腺皮质网状带分娩的化合物，在羟化酶的作用下合成睾酮及雄烯二酮。种子汤使不孕大鼠卵巢形态变的正常，有成熟卵泡生成，卵巢间质有少量淋巴细胞浸润［7］，其中FSH、LH、E2 含量明显上升，说明垂体能增加下丘脑敏感性，增加机体分泌FSH、LH、E2，促进卵泡生长发育、颗粒细胞增生，从而使卵子成熟，具有排卵效果。种子汤给予不孕大鼠后其睾酮等含量下降，可能与卵巢分泌雄激素和肾上腺等减少有关，使卵巢中局部高雄激素得到缓解，解除性腺干扰，有助于改变卵泡闭锁现象［8］。

总之，种子汤通过活血补肾以调节大鼠小丘脑、垂体、卵巢功能，恢复卵巢部分功能。可能是通过调节神经-内分泌系统功能，促进其恢复下丘脑、垂体、卵巢功能，具有综合且多方面作用，需要进一步研究［9］。