宣伟军，黄力毅，宣毅，唐俊波，韦瑀龙

(1. 广西中医药大学第一临床医学院耳鼻咽喉科，南宁 530023； 2. Harvard Medical School，Harvard University，Boston，MA 02114，USA； 3. School of Engineering，Tufts University，Medford，MA 02155，USA； 4. 广西中医药大学瑞康医学院制药厂，南宁 530011)

老年性聋(Presbycusi)又称年龄相关性听力损失(Age—related hearing loss，AHL)，随着世界人口的老年化，其发病率逐年递增[1]，其病因病机复杂，防治极其困难，是当前耳科学研究的重要热门课题之一[2-4]。 前期研究表明，中药复方健耳剂在普通光镜下观察发现具有明显对抗C57BL/6J 小鼠老年性耳蜗毛细胞、耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)凋亡，以及保护听功能的药效作用[5-7]，但以往缺如小鼠老年性耳蜗神经细胞形态学电镜超微观察以及中药细胞靶向作用机制研究，因此，我们继续选择C57BL/6J 小鼠作为AHL模型，利用透射电镜重点观察老年性耳蜗外毛细胞(outer hair cell，OHC)、SGN 细胞核超微结构改变，利用形态学多重免疫荧光技术，配合激光共聚焦显微镜重点观察SGN 中神经元特异性核抗原蛋白(neuron-specific nuclear antigen，NeuN)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)定位表达，以及中药干预影响作用，以进一步揭示其对抗细胞凋亡以及靶向作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

SPF 级1 月龄刚断奶健康C57BL/6J 小鼠22只，雌雄各半，体重16 ～18 g，由北京维通利华实验动物技术公司提供【SCXK(京)2012-0001】，清洁级别一级，饲养于本单位SPF 动物实验室【SYXK(桂)2019-0001】，所有操作均符合广西中医药大学实验动物伦理学要求(审批号：IACUC 20161015)。

1.1.2 药物

复方健耳剂主要由葛根、丹参、黄芪、骨碎补等组成，由广西中医药大学瑞康医学院制药厂制备。经过水煮、浓缩、烘干、反复粉碎和过筛等流程，制成每克药粉相当于6.63 g 生药材。……