李倩晓 于勤 那荣妹 刘百亭

【摘要】 目的 探究微小RNA（miR）-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡过程中的调控作用及其机制。方法 选取大鼠H9C2心肌细胞株， 培养DMEM培养基， 将培养好的H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组（采用随机合成的miRNA片段通过脂质体2000转染试剂进行转染）、miR-1 inhibitor组（采用随机合成的miR-1 inhibitor片段通过脂质体2000转染试剂进行转染）、miR-499 mimics组（采用随机合成的miR-499 mimics片段通过脂质体2000转染试剂进行转染）。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染情况， 设置空白对照组、H2O2组（未进行转染的H9C2心肌细胞）、干预组A（miR-1 inhibitor转染的H9C2心肌细胞）、干预组B（miR-499 mimics转染的H9C2心肌细胞）、干预组C（miR-1 inhibitor+miR-499 mimics转染的H9C2心肌细胞）。通过H2O2诱导建立H9C2心肌细胞氧化应激模型。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖情况， 流式细胞仪检测细胞凋亡情况， Western Blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、特异性半胱氨酸酶3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果 miR-1 inhibitor组的心肌细胞miR-1表达明显低于空白对照组和阴性对照组， miR-499 mimics组心肌细胞miR-499表达明显高于空白对照组和阴性对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。空白对照组与阴性对照组的miR-1与miR-499表达比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组的（0.47±0.23）OD比较， H2O2组心肌细胞增殖（0.12±0.09）OD显著降低， 差异具有统计学意义（P<0.05）;与H2O2组比较， 干预组A心肌细胞增殖（0.27±0.12）OD和干预组B心肌细胞增殖（0.29±0.13）OD均明显升高， 干预组C心肌细胞增殖（0.36±0.17）OD进一步升高， 但仍低于空白对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组比较， H2O2组细胞凋亡率显著升高， 差异具有统计学意义（P<0.05）;对比H2O2组， 干预组A、干预组B细胞凋亡率均明显降低， 干预组C细胞凋亡率进一步降低， 但仍高于空白对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组比较， H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低， 而Caspase-3蛋白表达水平明显升高， 差异具有统计学意义（P<0.05）;与H2O2组比较， 干预组A和干预组B的Bcl-2蛋白表达水平均明显升高、Caspase-3蛋白表达水平均明显降低， 但仍低于空白对照组， 而干预组C的Bcl-2蛋白表达水平进一步升高、Caspase-3蛋白表达水平进一步降低， 但仍高于空白对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡过程中发挥重要的调控作用， miR-1可能通过下调Bcl-2、上调Caspase-3蛋白表达促进心肌细胞凋亡， 而miR-499则通过上调Bcl-2、下调Caspase-3蛋白表达抑制心肌细胞凋亡， 针对这两个环节进行干预有望成为将来临床治疗心脏疾病的新途径。

【关键词】 微小RNA-1;微小RNA-499;心肌细胞;细胞增殖;细胞凋亡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.086

心肌细胞凋亡在心力衰竭、心脏重构中扮演着重要角色， 减少心肌细胞凋亡可改善心脏重构， 改善心功能[1]。近年研究发现， 微小RNA（microRNA， miRNA， miR）在胚胎发育、细胞增殖、分化、凋亡、代谢、肿瘤发生等过程中发挥重要作用[2]。其中， miR-1、miR-499与心脏疾病的关系极为密切。本研究将miR-1 inhibitor、miR-499 mimics转染至H2O2处理的心肌细胞， 探究miR-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡过程中的调控作用及其机制。……