郭康康，董世山,2*，李延明，张 博，崔 欢，武 华，阴雅洁，张 诚，陈立功,2，徐倩倩

（1. 河北农业大学 动物医学院，河北 保定 071001；2. 农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站，河北 保定 071001；3. 北京首农大红门肉类食品有限公司，河北 张家口 073121；4. 河北创安生物科技有限公司，河北 保定 071001）

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的一种急性、发热、接触性传染病[1-2]。该病在自然条件下只感染猪，不同品种、年龄、性别的猪四季均可发生[3-4]。猪瘟是严重危害畜牧业生产的重要疾病，长期以来，对养殖场造成不可估量的损失[5-6]。仔猪母源抗体水平与制定合理的免疫程序有直接关系，特别是在仔猪出生后，根据母源抗体水平，选择合理的首免日龄尤为重要[7]。目前，我国许多养殖场免疫程序单一且固定，其中首免日龄选择不合理，造成了免疫失败，致使后续的多次免疫效果差，猪群免疫力低[8]。针对生产过程中出现的这些问题，本研究从河北省张家口某规模猪场随机选择36 头母猪及其仔猪，通过ELISA方法检测亲代母猪和仔猪CSFV 抗体水平，研究母猪不同CSFV 抗体水平与仔猪母源抗体衰减规律的变化，选择合理的首免日龄[9-10]，为规模化猪场提供科学的猪瘟免疫程序。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 IDEXX CSFV 抗体检测试剂盒购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；36 头母猪为河北张家口市某规模猪场随机选取猪，仔猪为对应母猪所产仔猪。

1.2 实验设计 36 头母猪产仔后第1 d 分别采血2 mL，分离血清置于-20 ℃保存备用。每头母猪所产仔猪分别随机选择3 头，于第3 周龄、4 周龄、5周龄、6 周龄、7 周龄、8 周龄各采血2 mL，分离的血清置于-20 ℃保存备用（试验前产后母猪并未检测出猪瘟野毒感染）。试验期间选定的仔猪不做任何疫苗免疫。采用IDEXX CSFV ELISA 抗体检测试剂盒检测36 头母猪和所产仔猪第3 周龄～第8 周龄血清抗体阻断率，根据所测的母猪CSFV 抗体阻断率值分为抗体阻断率80%以上、70%～79%、60%～69%、50%～59%、49%以下。每个范围内母猪与其所产仔猪一一对应。

1.3 结果判定 根据IDEXX CSFV 抗体检测试剂盒说明书要求操作，利用数据分析软件（X Check Plus）对母猪和所产仔猪第3 周龄～第8 周龄CSFV 抗体阻断率进行统计分析（抗体阻断率数值用平均值±标准差表示），使用EXCLE 计算衰减变化,利用GraphPad Prism 7 软件相绘制母猪与所产仔猪3 周龄CSFV抗体阻断率相关性折线图[11]。

2 结 果

2.1 36 头母猪CSFV 抗体阻断率检测结果 经IDEXX CSFV 抗体检测试剂盒检测36 头母猪和所产仔猪第3 周龄～第8 周龄CSFV 抗体阻断率。结果显示，36 头母猪中CSFV 抗体阻断率80%以上共6 头，70%～79%之间11 头，60%～69%之间8 头，50%～59%之间5 头，49%以下的6 头（表1）。表明36 头母猪（未接种猪瘟疫苗和产后母猪并未检测出CSFV 野毒感染）中有83.3%的母猪CSFV 抗体水平较高，整体CSFV 抗体水平分布不均匀。

2.2 母猪与仔猪CSFV抗体相关性分析 通过ELISA方法检测36头母猪和所产仔猪第3周龄～第8周龄血清抗体阻断率，经相关系数计算得出仔猪3周龄时的CSFV抗体阻断率整体上与母猪CSFV抗体阻断率相近。

（zi 为母猪抗体阻断率，xi 为对应3 周龄仔猪抗体阻断率，n 为总样本量，n=36）经计算得出相关系数为0.99。母猪抗体阻断率高，则对应仔猪各周龄抗体阻断率均较高（图1和表1）。表明仔猪在3周龄时CSFV抗体与对应母猪CSFV抗体水平相近，仔猪CSFV抗体阻断率随着仔猪周龄增加而逐渐降低。

2.3 仔猪母源CSFV抗体衰减规律 通过ELISA方法检测36头母猪和所产仔猪第3周龄～第8周龄血清抗体阻断率。结果显示，仔猪母源CSFV 抗体随周龄的增加而不断衰减，当母猪CSFV 抗体阻断率高时，所产仔猪母源CSFV 抗体较高，母源CSFV 抗体对仔猪保护持续的时间长。相反，所产仔猪母源CSFV 抗体较低，母源CSFV 抗体对仔猪保护持续时间短。母猪CSFV 抗体阻断率在80%以上时，母源CSFV 抗体在仔猪第8 周时仍具有保护力；母猪CSFV 抗体阻断率在70%～79%时，母源CSFV 抗体在仔猪第7 周龄时不再具有保护力；母猪CSFV 抗体阻断率在60%～69%时和50%～59%时，母源CSFV 抗体分别在仔猪第5 周龄和第4周龄不再具有保护力[12]。

表1 不同母猪CSFV 抗体阻断率范围内仔猪第3 周龄～第8 周龄猪瘟抗体阻断率Table 1 Antibody blocking rate of piglets from 3 to 8 weeks of age in the range of different sows antibody blocking rate against CSFV

图1 母猪与所产仔猪3 周龄CSFV 抗体阻断率相关性Fig.1 Correlation of antibody blocking rate against CSFV between sows and 3-week-old piglets

利用EXCEL 拟合总体指数曲线y=86.501e-0.159x，分析衰减规律[11]，结果显示，比较总体拟合的指数曲线所求出的母源CSFV 抗体对仔猪有效保护日龄持续至5.2 周龄，与真实数据相差较大，所以采用范围内分别拟合指数曲线来求母源CSFV 抗体对仔猪有效保护力持续的时间。其中母猪抗体阻断率在80%以上时，拟合指数曲线为：y=98.127e-0.089x（图2A），可计算出母源CSFV 抗体对仔猪有效保护可持续到60 日龄；70%～79%时，拟合指数曲线为：y=93.15e-0.149x（图2B），计算出母源CSFV 抗体对仔猪的有效保护持续到50 日龄；而母猪抗体阻断率在60%～69%时和50%～59%时，拟合指数曲线分别为：y=86.186e-0.22x和y=77.685e-0.272x（图2C 和图2D），计算出母源CSFV 抗体对仔猪有效保护仅仅持续到36 日龄和29 日龄，时间较短（横轴为周龄，x 表示；纵轴为抗体阻断率，y 表示）。表明母猪CSFV抗体阻断率高，母源CSFV 抗体对仔猪的保护持续时间长。

2.4 仔猪猪瘟疫苗首免日龄的推断 仔猪猪瘟疫苗首免日龄的确定是根据CSFV 抗体阻断率＜40%的个体数占总数的20%～40%为标准。因此根据公式：

（a为经统计对应区间内阻断率＜40%的个数，i为周龄取值，ai为经统计对应区间在i 周时阻断率＜40%的个体数，n 为区间内总样本数。y 为首免日龄）可计算首免日龄（表2）。

图2 不同母猪CSFV 抗体阻断率时仔猪在第3 周龄～第8 周龄抗体水平Fig.2 Antibody level of piglets at 3-8 weeks of age with differentsows antibody blocking rate against CSFV

表2 不同母猪CSFV 抗体阻断率范围内仔猪第3 周龄～第8 周龄猪瘟抗体阻断率＜40%的个体数及占比Table 2 The number and proportion of antibody blocking rate against CSFV at ＜40%in piglets aged 3-8 weeks in different ranges

根据上表得出仔猪猪瘟疫苗首免日龄的计算公式：y=1.19x-46.55（x 母猪CSFV 抗体阻断率，y 为首免日龄）。因此，经计算母猪CSFV 抗体阻断率在80%以上时，仔猪猪瘟疫苗首免日龄为56 日龄；母猪CSFV 抗体阻断率在70%～79%时，仔猪猪瘟疫苗首免日龄为首免日龄在42 日龄；母猪CSFV 抗体阻断率在60%～69%时和50%～59%时，仔猪猪瘟疫苗首免日龄为首免日龄分别为28 日龄和21 日龄。

3 讨 论

CSFV 感染可引起猪发生严重的传染病，猪瘟的爆发给养猪业带来巨大的经济损失[13]。截止到目前为止，接种猪瘟疫苗是防控猪瘟最有效的方法。在本试验中，通过检测母猪及其后代在第3 周龄～第8 周龄的CSFV 抗体阻断率，分析母源抗体衰减规律，为后期制定CSF 的合理免疫程序提供了依据。

试验对象上，对试验组进行了详细的划分。测出母猪和所产仔猪CSFV 抗体阻断率后，对数据进行处理分析，这与于吉峰[14]、李建玲[15]等人设计相同，在此基础之上，本研究进一步优化了试验设计方案，经IDEXX CSFV 抗体检测试剂盒检测36 头母猪和所产仔猪第3 周龄～第8 周龄CSFV 抗体阻断率，根据母猪CSFV 抗体阻断率划分了5 个范围，每个范围内CSFV 抗体阻断率相近，进一步分析母猪CSFV 抗体阻断率在同一个范围内仔猪在第3 周龄时～第8 周龄时的猪瘟抗体衰减变化，这使得数据分析更加细致，结果更具有针对性。

在本研究中，仔猪出生后第一时间吃到初乳，且无其它疾病等因素干扰，母猪CSFV 抗体水平高的，仔猪CSFV 抗体水平相应也高。仔猪CSFV 抗体阻断率随周龄增长逐渐降低，这与姚俊庸[16]、林纯洁[17]所得结论一致。

母源抗体可以通过初乳使初生者获得保护，一般情况下仔猪猪瘟疫苗首免日龄的判断以CSFV 抗体阻断率＜40%的个体数占总数的20%～40%为标准。在试验结果中显示，母猪CSFV 抗体阻断率在不同范围内的仔猪，仔猪猪瘟疫苗首免日龄分别为56 日龄，42 日龄，28 日龄和21 日龄。在实际生产中，母源抗体的存在会降低初生儿对初免疫苗的免疫反应[18]，导致免疫效果较差，在制定CSFV 的免疫程序时，应该充分考虑母源抗体水平的干扰，因此要等母源抗体的下降到适当水平后才进行初免，从而达到良好的免疫效果，避免损失。

CSFV 抗体水平检测数据是制定合理免疫程序的前提[19]。IDEXX CSFV 抗体阻断ELISA 试剂盒，在其判断标准中，CSFV 抗体阻断率≤30%为阴性，30%＜阻断率＜40%为可疑，阻断率≥40%为阳性，CSFV抗体阻断率在50%以上具有保护力[20]。经计算母猪CSFV抗体值阻断率在80%以上时，母源CSFV抗体对仔猪的保护持续时间为60 日龄；母猪CSFV 抗体阻断率在70%～79%时，母源CSFV抗体对仔猪的保护持续到50 日龄；母猪CSFV 抗体阻断率在60%～69%时和50%～59%时，母源CSFV 抗体对仔猪的保护持续到36日龄和29日龄。部分报道依据该试剂盒大于40%为猪瘟疫苗合格标准，在实际生产中要以阻断率大于50%为判断依据更合理。

综上所述，本试验对母猪CSFV 抗体与仔猪母源抗体衰减规律的研究，进一步为规模猪场选择合理的猪瘟疫苗首免日龄提供了良好的试验依据。