李彦钊 邓东风 任 刚 孙 晶 郎明飞 张绪新

（大连大学附属中山医院，辽宁 大连 116001）

旱莲草为中医常用的治疗出血性疾病的药物，属于双子植物属菊科，止血纱是一种生物医学材料，其作用是加速手术中的凝血，从而达到快速止血的目的，本实验是通过制造大鼠脑出血模型，中草药旱莲草超微粉与生物医学材料旱莲草联合为实验组，另外设计三组对照组，通过观察止血时间、再出血率等研究，反应不同组别止血材料的止血效果，并通过光学显微镜观察细胞的形态结构。

1 材料与方法

1.1 材料：动物：选取Wistar大鼠48只，由大连大学附属中山医院动物实验中心提供，大鼠体质量一般为300～350 g，采取分笼喂养，每笼6只大鼠，饲养环境良好，要求笼内温度为20～23 ℃。试剂：本实验中止血纱主要材料为纯棉纤维，为不可吸收产品，经羟甲基化处理后，再由环氧乙烷灭菌制成，其中羧甲基纤维素为主要止血成分。止血纱布应无皮肤致敏反应，无皮肤刺激反应。旱莲草超微粉经扫描电镜检测其粒径为5～10 μm，呈正态分布。

1.2 实验方法：动物模型建立：选择雌雄不限Wistar大鼠 48只，平均体质量为300～350 g。术前12 h禁食，不禁水。麻醉药选取10%水合氯醛，经腹腔麻醉后，将大鼠固定在鼠板上，局部备皮，消毒后纵行切开颅顶正中皮肤，开颅部位在距矢状缝，冠状缝各5 mm处，用口腔科磨钻磨出直径约为5 mm的骨窗，保持硬脑膜完整。后采用外科3-0缝合针纵行划开硬膜暴露，硬脑膜出血采用生理盐水棉片压迫止血。应用显微硬膜钩镊夹取大小约2 mm×2 mm×1 mm大小皮层范围，造成大鼠外伤出血模型，手术结束后，缺损颅骨以骨蜡轻柔封口，全层缝合皮肤。分组：本实验设计为4组，每组平均12只Wistar大鼠，其中实验组为D组，材料为中草药旱莲草超微粉与生物医学材料止血纱布联合；对照组有三组，分别为A组自凝组；B组实验材料为止血纱布，术中出血采用压迫止血；C组实验材料为单纯旱莲草超微粉。

1.3 观察指标：造成大鼠出血后采取不同止血方式完全止血后缝合切口。术后大鼠正常进食，分别于术后5、10、15 d处死大鼠。止血效果的观察指标为各组的完全止血时间、各组术后再出血率，具体方法为用秒表记录各组大鼠完全止血时间，计算平均止血时间；记录不同组大鼠之间术后再出血发生例数，计算出血率；最后观察光学显微镜下观察细胞形态结构。

1.4 统计学分析：实验数据数据均采用SPSS19.0统计软件分析处理，计量资料以均数±标准差（）表示，并做方差齐性检验。若不符合正态分布者，用非参数检验。计数资料用χ2表示，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠平均止血时间比较：见表1。与对照组比较，aP＜0.01；与止血纱比较bP＜0.01；与旱莲草超微粉比较cP＜0.05，差异有统计学意义，旱莲草超微粉联合止血纱止血时间明显小于其他三组对照组。

表1 各组大鼠平均止血时间比较（）

表1 各组大鼠平均止血时间比较（）

2.2 各组大鼠再出血发生率比较：A组再出血9只，再出血率为75%；再出血率为B组再出血6只，再出血率为50%；C组再出血4只，再出血率为33%；D组再出血1只，再出血率为8%；采用χ2检验，P＜0.05差异有统计学意义，旱莲草超微粉联合止血纱止血再出血率低于其他三组对照组。见图1。

图1 光学显微镜下观察细胞形态结构

A组为自凝组；B组为采用止血纱布压迫止血组；C组为采用旱莲草超微粉止血组；D组为采用旱莲草超微粉联合止血纱布止血组，光镜下观察旱莲草超微粉联合止血纱组细胞形态规整，无明显细胞水肿。

3 讨论

旱莲草在传统医学药物中扮演重要角色，在不同国家及地区作为一种传统中药材被使用，尤其在热带和亚热带地区，因其止血、抗病毒、免疫调节等作用，被称一种“转世”药物，是一种不可估量价值的药物。在作神经外科患者手术时，由于脑组织血供丰富，术中快速、彻底止血是往往关系到手术成败。止血不仅与手术器械和手术技巧密切相关，而且与局部止血材料的使用密切相关。一种好的止血材料不仅能快速有效地止血，而且缩短手术时间，对预防术后并发症起到积极作用。

在脑外科手术中，皮质表面出血和脑组织创面出血的治疗仍是神经外科领域的难题之一[1-2]。术中多采用如止血纱、明胶海绵、止血粉等外用止血材料。然而，不同止血材料均各有其优缺点，Peng和Shek[3]的研究表明理想的止血材料具有以下特点：止血快；在体内可以吸收；操作方便；质量小且易保存；没有潜在病源性；不增加组织感染率；对组织愈合不影响等。国内外一直致力于研发能对脑组织创面迅速止血可吸收性止血材料。但目前止血材料研究比较单一，将止血药物与止血敷料进行复合或者共载得到的含药敷料的研究较少。

现今应用于神经外科局部止血剂的种类逐渐增多，但止血效果理想而生物兼容性好并无明显不良反应的止血剂仍有研究的价值。我们查阅文献，中草药旱莲草，在临床上是一种常用于治疗出血症的中草药。现代药物理论研究表明，中草药旱莲草具有促进血液凝固、保护肝功及调节免疫等多种药理作用，并且可以抗炎、镇痛、抗氧化、抗肿瘤等多种功能[4-5]。化学成分主要有甾体类、香豆草醚类、噻吩类及黄酮类等[6]，且来源广泛、安全可靠。王建等[7]通过对小鼠胃出血止血的研究表明：旱莲草可提高血小板数量、增加血小板聚集率、提高纤维蛋白原含量，对血小板和纤维蛋白原的影响显著。刘世望等[8]将不同剂量的旱莲草提取液与抗凝兔血混合后测定凝血时间，发现旱莲草叶提取物最强促凝血活性的浓度为0.5%，最短凝血时间为16 s。黄酮类化合物在植物界分布很广，在植物体内大部分与糖结合成苷类或碳糖基的形式存在，也有以游离形式存在的。天然黄酮类化合物母核上常含有羟基、甲氧基、烃氧基、异戊烯氧基等取代基。黄酮类具有抗氧化、抗癌、抗血管增生、消炎、抗变应性、和抗病毒的功效，最新研究表明旱莲草最主要的天然止血活性成分为天然黄酮类物质[9-10]。

生物医学材料止血纱的主要止血机制是以网眼纱布为载体，血小板聚集在网眼纱布上作为基质，遇到出血后迅速凝结成血凝块，达到有效止血目的，其止血途径主要是通过物理作用使血液迅速凝固，研究表明，止血纱能有效控制微小血管及小血管的出血[11-12]。

本研究设计大鼠脑出血模型，旱莲草超微粉联合止血纱组为实验组，自凝组、止血纱组及旱莲草组为对照组。通过不同止血材料止血效果的比较得出旱莲草超微粉联合止血纱组平均止血时间较对照组明显缩短，术后再出血发生率旱莲草超微粉联合止血纱组亦优于对照组，光学显微镜下观察旱莲草超微粉联合止血纱组较对照组细胞形态结构规整，无明显水肿。说明止血纱联合旱莲草超微粉效果优于单一止血效果，在实验研究中，我们没有发现旱莲草与止血纱之间有排异反应，二者与实验动物之间亦无不良反应发生。

本次研究通过不同止血材料的止血效果对比及光学显微镜下鼠脑的病理切片观察，证实旱莲草超微粉联合止血纱止血效果优于单一止血材料的应用，且光学显微镜下细胞形态规整。但对旱莲草止血成分的进一步提纯、不同超微粉颗粒直径对止血效果的影响、组织相容性仍需进一步动物实验研究。