王小言 夏鹰 彭俊 金虎 陈伟明 陈晓东 聂柳 郑忠涛

阿尔兹海默病(Alzheimer disease，AD)典型病理学改变主要为大脑皮质神经元细胞外有大量淀粉样蛋白斑块形成，β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)沉积可引起细胞凋亡，在AD发病机制中起重要作用[1-2]。肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)是一种长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)，在高糖诱导的内皮细胞炎症、脂多糖(LSP)诱导的炎症、AD及多种癌症中发挥重要作用，且与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路密切相关[3-7]，但MALAT1是否在大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中发挥作用尚鲜有报道。PC12细胞具有神经内分泌细胞的一般特征，广泛作为模型细胞用于神经生理学和药理学研究[8]。本研究通过建立Aβ1-42诱导PC12细胞凋亡损伤模型，旨在观察下调MALAT1表达对PC12细胞凋亡损伤及PI3K/Akt通路的影响，为AD发病机制及靶向治疗提供一定理论参考。

1 材料和方法

1.1 材料大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞由中国医学科学院药物研究所提供。

1.2 主要试剂及仪器高级DMEM培养基(12491-023)购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司，胎牛血清(FBS，10099141)购自美国Gibco公司，Aβ1-42(SIGMA-A9810)购自美国Sigma，MALAT1及其内参引物序列、MALAT1干扰序列和对照组序列均由广州锐博生物科技有限公司合成，Trizol试剂(R0016)为上海碧云天公司产品，TB Green® Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus，RR820A)、PrimeScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)均购自TaKaRa公司，Lipofectamine® 2000转染试剂盒(11668-1.5 mL)、兔源一抗p-PI3K(MA5-14870)、Cleaved-caspase3(700182)、二抗羊抗鼠IgG(A-11001)、羊抗兔IgG(A-11008)均购自美国Invitrogen公司，兔源一抗AKT(ab18785)、p-AKT(ab38449)、PI3K(ab70912)、Bcl-2(ab185002)、Bax(ab32503)、β-actin抗体(ab179467)购自英国Abcam公司，CCK-8试剂盒(YT128)购自北京百奥莱博生物科技有限公司，AnnexinⅤ-FITC凋亡检测试剂盒(APOAF)购自美国Sigma公司。FACS Canto Ⅱ流式细胞仪购自美国BD公司，FC酶标仪、Forma Steri-Cycle i160 5%(体积分数)CO2培养箱购自美国Thermo Fisher公司，IX73倒置显微镜购自日本Olympus公司等。……