张宁萍 方颖 刘雪静 谢黎 吴健 沈锡中

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发病率日益升高，但其发病机制尚未明确。NASH的肝细胞以线粒体异常为特征，线粒体损伤是促进单纯性脂肪肝向NASH进展的重要因素之一[1- 2]。正常生理条件下，受损线粒体可以通过自噬机制(即线粒体自噬)被及时清除[3]。肝细胞自噬缺陷与脂肪滴堆积、胰岛素抵抗、NLRP3炎症小体活化有关[4]。N-乙酰半胱氨酸(NAC)是还原型谷胱甘肽的前体，有保护肝细胞作用，用于药物性肝损伤的治疗[5]。研究者的前期研究提示，NAC能改善游离脂肪酸诱导的大鼠原代肝细胞线粒体自噬功能缺陷[6]，但其体内作用尚不明确。本研究通过建立高脂高糖诱导的NASH小鼠模型，以NAC进行干预，观察NAC对NASH小鼠肝细胞线粒体自噬的影响。

材料与方法

一、实验动物

清洁级C57BL/J6小鼠18只，6～8周龄，雄性，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。饲养于复旦大学上海医学院实验动物中心。

二、主要试剂与仪器

主要仪器：荧光分光光度计(Nanodrop)，PCR仪(BIO-RAD)，电泳仪(BIO-RAD)，全自动化学发光图像分析系统(Tanon)，Real-Time定量PCR仪(Thermo)，快速型血糖仪(罗氏公司)，单电子激光共聚焦显微镜(Leica)，倒置显微镜(Nikon)，荧光显微镜(Nikon)。主要试剂：甘油三酯检测试剂盒(南京建成生物研究所)，Masson染色试剂盒(武汉谷歌生物科技有限公司)，抗体：β-actin(Santa Cruz)，COX IV(Abcam)，LC3B(Novus)，Parkin(Proteintech)，PINK1(Santa Cruz)，P62(Proteintech)。

三、动物分组与模型建立

小鼠分别于耳缘打孔编号，在适应性喂养1周后随机分为3组：正常饮食对照组，高脂高糖诱导NASH组(HFCD)，高脂高糖喂养同时添加NAC干预实验组(HFCD+NAC)，每组6只。高脂高糖诱导NASH给药方法参见本课题组研究论文[7]，HFCD+NAC组在高脂高糖喂养同时按照每日150 mg/kg经饮用水给予NAC干预。……