孙 勃 刘士波 王 培 薛鑫鑫 高云峰 付世杰

(承德医学院附属医院手足外科，承德 067000)

近年来，骨质疏松和骨折患者的发病率不断升高，骨愈合需要比较长的周期，因此促进骨愈合对于骨质疏松和骨折患者的治疗具有重要意义。由感染所致的内毒素血症以及创伤引起的骨感染均可造成骨坏死，感染性骨坏死是骨科领域研究的难点和热点问题。但感染性骨坏死的机制尚不十分清楚，因此探讨骨坏死的机制对早期预防和治疗骨坏死具有重要意义。细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌主要的致病成分，可引起组织细胞的功能紊乱，研究发现LPS可影响成骨细胞的增殖、分化和凋亡，延迟骨愈合[1，2]。MAPK/ERK1/2信号通路在成骨细胞的增殖、分化和凋亡中发挥重要作用，通过调控MAPK/ERK1/2信号通路可促进成骨细胞增殖和分化，抑制成骨细胞凋亡[3-5]。本文通过研究LPS对成骨细胞活性和凋亡以及MAPK/ERK1/2信号通路的影响，探讨LPS是否通过MAPK/ERK1/2信号通路影响成骨细胞活性和凋亡。

1 材料与方法

1.1材料 小鼠前体成骨细胞株MC3T3-E1(美国ATCC公司)，LPS、Hochest 33258(美国Sigma公司)，DEME/F12培养基、胎牛血清(美国Hyclone公司)，ERK1/2激酶抑制剂U0126(德国Merck公司)，噻唑蓝(MTT)、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)活性测定试剂盒(美国invitrogen公司)，兔抗鼠C-Caspase 3单克隆抗体、兔抗鼠Bcl-2单克隆抗体、兔抗鼠Bax单克隆抗体、兔抗鼠ERK1/2单克隆抗体、兔抗鼠p-ERK1/2单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗等(美国Gibco公司)等。

1.2方法

1.2.1细胞培养 将MC3T3-E1细胞接种到DEME/F12培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素)的96孔板中培养，3 d进行1次换液，细胞生长至80%以上融合时进行传代培养(传代比例1∶2)。……