刘琴，张泉鹏，周亚平，孟兴祥，成玉梅，施开平，李国平，彭雅婷

（1.昆明市动物卫生监督所，昆明 650401；2.云南省嵩明县动物卫生监督所，嵩明 651700）

支原体旧称霉形体，是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3μm。支原体广泛存在于人和动物体内，能够引起奶牛肺炎、关节炎、乳房炎、生殖器官炎症等，1961年首次在美国奶牛乳房炎中分离到支原体，在我国1983年首次报道了奶牛乳房炎乳中分离到支原体。支原体感染的乳房炎病程长，治疗费用高。大肠杆菌乳房炎在临床上很常见，主要是由于环境卫生差、消毒不彻底以及挤奶操作不当所造成。2019年5月，昆明市某奶牛场发生了一起乳房炎病例，共3头发病，临床表现为乳房肿硬、乳区发热，乳汁黄色呈豆腐渣或絮状。经细菌分离鉴定和奶牛乳房炎四重PCR诊断为大肠杆菌和支原体混合感染。现将其报告如下。

1 材料

1.1 病料

用无菌注射器抽取病牛乳房中乳汁，共3头牛的3份患乳区混合样品。

1.2 仪器

全自动细菌鉴定仪（VITEK 2 COMPACT，法国梅里埃）、冷冻离心机（贝克曼）、荧光定量PCR仪（STEP ONE PLUS美国ABI，无Cy5荧光通道），生化培养箱（上海一恒）。

1.3 试剂

普通琼脂培养基、血平皿、革兰氏阴性生化鉴定卡（法国梅里埃）、革兰氏阴性细菌药敏卡片（法国梅里埃），4联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒（含DNA提取试剂，深圳易瑞），革兰氏染色液（环凯生物）。

2 方法

2.1 细菌分离和革兰氏染色鉴定

2.1.1 细菌培养

灭菌划线法将乳汁分别接种于普通琼脂平皿和血平皿上，37℃培养24～48h。……