李红芬 汤由之 张炜明 李霄

【摘 要】  目的 ： 探讨乳腺癌HER-2、FISH分子病理检测技术及临床意义。方法 ： 选取江苏省人民医院病理科2017年8月份分析的100个乳腺癌HER-2阳性蜡块为研究对象，分别采用免疫组化技术（IHC）和荧光原位杂交技术（FISH）对蜡块标本中的HER-2基因扩增以及HER-2蛋白表达进行比对分析。结果 ： FISH检HER-2基因扩增阳性30例（30%），IHC检测蛋白表达（-～+）80例，HER-2蛋白表达（++）4例，HER-2蛋白表达（+++）8例。结论 ： IHC检测HER-2蛋白表达（++～+++）与FISH检测HER-2基因的扩增具有很高的一致性。乳腺癌HER-2 FISH分子病理检测技术对乳腺癌诊断及分型、发生、发展，对于IHC（++～+++）者需要进一步进行FISH检测，提高检测的准确性。

【关键词】  乳腺癌;HER-2;FISH分子病理检测技术

人表皮生长因子受体2（HER-2）作为一种诊断与预测性标记在乳腺癌标本中扮演着核心角色。20%～35%的浸润性乳腺癌存在HER-2基因的扩增及蛋白的高表达。HER-2基因（又名HER-2/neu，c-erbB）位与17q12，是表皮生长因子受体（HER：HER-1～4）家族成员之一，（HER）家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。FISH是检测HER-2基因状态的金标准[1]。本研究主要探讨乳腺癌HER-2、FISH分子病理检测技术及临床意义，汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取江苏省人民医院病理科2017年8月份确诊为乳腺癌的患者100例为研究对象，年龄25～69岁，平均年龄（49.26±10.34）岁;病理类型：浸润性小叶癌7例，导管内原位癌13例，髓样乳腺癌8例，浸润性导管癌63例，粘液腺癌4例，小叶原位癌5例;肿瘤平均直径为（3.65±0.51）cm;组织学分级：1级患者为35例，2～3级患者为65例。所有患者的标本在离体后60min内均需要进行10%甲醛固定石蜡包埋处理，每一个切片的厚度大致控制在3～4μm。

1.2 方法

石蜡标本切片操作步骤及注意事项：1）切片前分别清洁切片机、毛刷、镊子。2）摊片仪换液后打开开关调至45℃。3）给切片机换新刀片。4）蜡块冷冻5min。5）每个蜡块切4张4μm防脱切片备用，每个蜡块切1张4μm切片染HE。

石蜡FISH检测实验流程：1）烤片。切好的片子于70℃培养箱烤片1h以上;2）脱蜡。烤片后立即置二甲苯中，室温，二甲苯3次，每次10min;3）室温，无水乙醇2次，每次5min;4） 室温。85%乙醇、70%乙醇各3min;5）玻片冲水中3min，取出。6）95℃以上煮片20min。7）玻片冲水中2～3min，取出。8）胃酶消化，37℃，2.5mg/mL，胃酶工作液处理10min，可根据实际情况进行调整;9）室温下将玻片置于2xssc溶液中漂洗1次，每次5min;10）室温下将玻片置于2xSSC溶液中漂洗1次，每次5min;11）将玻片依次置于70%，85 %，100%乙醇中各3min脱水，自然干燥玻片;12）按照FISH操作步骤进行FISH实验;13）变性：83℃（根据各实验室实际条件决定），10min;14）杂交：42℃湿盒暗处孵育过夜;15）70℃，0.4xssc 2min;16）室温，2xssc 2min;17）室温，70%乙醇溶液3min;18）暗處自然干燥玻片;19）室温，将15μL DAPI复染剂滴加于玻片杂交区域，立即盖上盖玻片（DAPI自冰箱取出平衡到室温后轻弹混匀）;20）暗处放置10～20min，在荧光显微镜下选用合适的滤片组观察玻片。

FISH操作步骤：1）探针准备;杂交使用的探针混合物配比请参照产品说明书配置;2）将10μL探针混合物滴加于玻片杂交区域，立即加盖玻片，用橡皮胶封边（注意避免气泡）。

2 结果

2.1 两种方法检测情况

FISH检HER-2基因扩增阳性30例（30%），IHC检测蛋白表达（-～+）80例（80%），Her-2的蛋白检出率明显高于Her-2基因扩增（P<0.05）。

2.2 FISH检测基因扩增与IHC检测蛋白表达符合率

两者的检测结果符合率为78.4%，其中两者在检测Her-2蛋白表达阳性（+++）上具有很高的一致性，在表达阴性（-）上符合率一致，而在检测可以阳性（++）上差异性很大。

3 讨论

分子靶向治疗是当今肿瘤治疗领域的热点，代表了肿瘤药物治疗的未来发展方向。FISH检测技术通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。在荧光显微镜下观察并分析细胞核内染色体（或染色体片段）上基因状态的信息。目前HER2基因状态检测的探针多为同时含有HER2基因和该基因所在的第17号染色体着丝粒（CEP17）序列的双探针，也可采用仅含有HER2基因的单探针[2]。FISH检测技术进行在乳腺癌受体家族的诊断中具有重要意义。随着分子生物学的发展，人们认识到一些信号传导通路在乳腺癌的发生发展以及对治疗疗效的影响中也起着重要的作用。这其中最主要的就是EGFR家族，它是表达在上皮来源组织细胞表面的一种受体，家族中共有4位HER1～4，属于酪氨酸激酶。荧光原位杂交FISH检测技术可以精准的判断基因扩增或缺失，其临床意义：1）指导乳腺癌赫赛汀的使用-研究表明，对于HER2扩增阳性的乳腺患者使用赫赛汀后会得到更好的预后效果，并且，使用大剂量蒽环类药物的治疗效果优于常规剂量的治疗效果[3]。2）指导临床常规药物的运用-研究表明HER2/neu基因扩增的病人用高剂量的蒽环类和紫杉醇药物更有效;3）预后判断-HER2/neu基因扩增的病人预后差，存在高复发率的危险。4）免疫组化无法判断是因为HER2/neu基因扩增还是由于17号染色体的非整倍性造成的蛋白表达，而17号染色体的非整倍性扩增的患者对于赫赛汀治疗效果不明显;FISH可以解决这个问题。

总之，Her-2蛋白表达和基因扩增对到乳癌有很大的影响，IHC和FISH检测结果的一致性较好，可以将IHC作为初筛方法，对于IHC检测结果为（+）～（+++）的患者需要进一步进行FISH检测，以提高检测的准确性。

参考文献

[1]  周国江，杨勇，赵子龙， 等.乳腺癌HER-2基因扩增与HER-2neu蛋白表达的一致性及其与临床病理特征的关系[J].实用癌症杂志，2018，33（05）：728-731.

[2] 要建超.乳腺癌组织中HER-2蛋白表达和HER-2基因检测及临床意义[J].中医临床研究，2018，10（21）：82-85.

[3] 徐娟，涂军，黄智雄.乳腺癌HER-2基因扩增与HER-2neu蛋白表达的病理研究[J].医疗装备，2017，30（15）：61-62.