宋绍征，于康英，张婷，陆睿，潘生强，周鸣鸣，成勇

研究报告

/双基因转染山羊乳腺上皮细胞表达分析

宋绍征1，于康英1，张婷2，陆睿2，潘生强1，周鸣鸣1，成勇2

1. 无锡太湖学院护理学院，基础医学系，无锡 214000 2. 扬州大学兽医学院，江苏省转基因动物制药工程研究中心，扬州 225009

人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator, tPA)是一种被广泛应用于临床的溶栓药物。双基因共整合入生物体内能够产生协同作用，从而提高目的基因的表达水平。但是目前，利用基因与基因共整合以期提高tPA表达水平的相关研究较少。为筛选获得tPA高表达的/双基因整合的单克隆转基因山羊乳腺上皮细胞株，本研究以基因作为调控序列，构建乳腺特异性表达载体PCL25/gGH，并通过电转染将和双基因共转染山羊乳腺上皮细胞；通过G418筛选获得抗性细胞株，经PCR检测获得转基因单克隆细胞株；利用催乳素诱导tPA表达，收集48 h后细胞诱导液进行ELISA()和Western blotting检测并分析其tPA表达水平。结果表明，共获得142株抗性单克隆细胞，其中有53株单基因整合细胞株，34株/双基因整合细胞株，双基因整合率达23.9% (34/142)。共检测出29株细胞能够表达tPA，其中单基因表达细胞为12株，表达率为22.6% (12/53)；双基因表达细胞为17株，表达率为50.0% (17/34)；且单基因细胞表达tPA含量为7.5~52.0 μg/mL，而双基因细胞表达tPA含量为40~360 μg/mL，明显高于单基因表达水平。本研究通过电转染的方式成功获得了/双基因整合的单克隆山羊乳腺上皮细胞株，并证明双基因整合的细胞株表达tPA水平明显提高，为后期制备高表达转基因山羊奠定了基础。……