高 鹏， 覃诗琪， 唐美芳

（1.武汉华大医学检验所有限公司技术中心，湖北 武汉 430074；2.中国科学院大学华大教育中心，广东 深圳 518083）

目前，干血斑除被广泛应用于各种新生儿遗传代谢病筛查（“新筛”）检测，在基于飞行质谱或测序平台的人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）、耳聋、地中海贫血等基因检测领域也有所应用。我国每年有1‰～3‰的新生儿存在听力损失，而其中约50%因遗传导致[1]，新生儿耳聋基因检测对指导和干预迟发性和药物性耳聋具有重要意义[2]。目前，“新筛”在我国东部地区已实现普及，西部地区的普及率也快速提高，部分地区的“新筛”费用已被纳入各类医保体系中[3]。因此，通常需要处理大量需要同时做“新筛”和耳聋基因检测的干血斑样本，因此同一个采血卡样本会被反复打孔取样以完成不同类型的检测，极大地增加了试验人员的工作量，甚至会出现因频繁取样使样本不足而无法完成检测的现象，为疾病筛查带来诸多不便。

“新筛”需要提取血斑中的氨基酸和肉碱等胞外物质，耳聋基因检测需要提取细胞内的核酸，两者的目标检测物及其分布场所互不相同，因此本研究提出按先后顺序依次提取同一个干血斑中胞外和胞内产物，提取产物分别用于“新筛”和耳聋检测。然而，基于串联质谱的“新筛”检测通常先用甲醇提取干血斑中的代谢产物[4]，而甲醇可稳固细胞结构[5]，使细胞裂解的难度增大，给后续耳聋基因提取带来一定困难。因此，为避免反复取样，本研究在碱水煮沸法提取干血斑DNA的基础上进一步优化提取条件，以期实现用1个血斑先后完成“新筛”和耳聋的产物提取和检测，从而提高筛查中心的检测效率，促进自动化检测平台的搭建。……