钟涛 张国新 周迪夷

[摘要] 目的 探讨灵芝多糖对糖尿病肾病（DN）小鼠肾小管上皮细胞间充质转化（EMT）的影响。 方法 将40只C57BL/KsJ-db/db小鼠按体重随机分为5组，每组8只。正常组给予普通饲料喂养。模型组、灵芝多糖（GLP）低（100 mg/kg）、高（400 mg/kg）剂量组和厄贝沙坦组（50 mg/kg）给予高糖饲料喂养，DN小鼠造模成功后，各组每日灌胃给药，持续8周，测定各组小鼠肾功能、血脂等生理指标变化;取肾组织HE染色观察GLP对小鼠肾脏病理改变的影响，用Western blot和实时荧光定量PCR实验检测E-cadherin、α-SMA、TGF-β1、Fibronectin、Vimentin、N-cadherin、p-Smad2、p-Smad3、Smad2、Smad3蛋白表达及mRNA水平。 结果 与模型组比较，GLP低、高剂量组血脂代谢及肾功能升高（P < 0.05）。与模型组比较，GLP低、高剂量组及厄贝沙坦组E-cadherin蛋白及mRNA水平升高，而α-SMA、Fibronectin、Vimentin、N-cadherin蛋白及mRNA水平降低（P < 0.01）。Smad2、Smad3总蛋白表达水平无变化。 结论 GLP可能通过调节TGF-β1/Smad信号通路，抑制DN小鼠的EMT。

[关键词] 灵芝多糖;上皮细胞-间充质转化;糖尿病肾病;TGF-β1/Smad信号通路

[中图分类号] R587.24          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）02（c）-0009-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of ganoderma lucidum polysaccha-ride （GLP） on epithelial-to-mysenchymal transition （EMT） of renal tubular epithelial cells in diabetic nephropathy （DN） mice. Methods Forty C57BL/KsJ-db/db mice were randomly divided into 5 groups by weight. Normal group was fed with normal feed. Model group， GLP low （100 mg/kg）， high （400 mg/kg） dose groups and Irbesartan group （50 mg/kg， Irbesartan） were given high-sugar dieat. Each group was given the drug by gavage daily for 8 weeks after successful modeling of DN mice. The changes of renal function， blood lipid and other physiological indexes were measured. The protein expression and mRNA level of E-cadherin， α-SMA， TGF-β1， Fibronectin， Vimentin， N-cadherin， TGF-β1， p-Smad2， p-Smad3， Smad2 and Smad3 were measured by Western Blot and Real-time PCR. Results Compared with the model group， the renal function and blood lipid metabolism in GLP low and high doses group were significantly decreased （P < 0.05）. Compared with the model group， the levels of E-cadherin protein and mRNA were increased in the GLP low and high doses group and the Irbesartan group， while the levels of α-SMA， Fibronectin， Vimentin， N-cadherin protein and mRNA were decreased （P < 0.01）. The expression levels of Smad2 and Smad3 were unchanged. Conclusion GLP inhibits EMT maybe via inhibition of TGF-β1/Smad signaling pathway.

[Key words] Ganoderma lucidum polysaccharide; Endothelial to mesenchymal transition; Diabetic nephropathy; TGF-β1/Smad signaling pathway

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常见的严重的微血管病变并发症[1-2]，肾间质纤维化是其主要病理变化之一[3]，其初始环节之一是肾小管上皮-间充质转化（endothelial to mesenchymal transition，EMT）[4-5]，而转化生长因子-β1（TGF-β1）是其发生的重要诱导因子[6]。灵芝多糖（ganoderma lucidum polysaccharide，GLP）具有降血糖、免疫调节等活性[7-8]。因此，本研究通过给予DN动物模型不同剂量的GLP，观察GLP对DN的保护作用，从TGF-β1/Smad通路探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级2型糖尿病（T2DM）模型C57BL/KsJ-db/db雄性小鼠40只，购于上海斯莱克动物实验有限公司，动物生产许可证号：SCXK（沪）2017-0015。饲养于浙江中医藥大学动物实验研究中心，实验饲养室许可证号SYXK（浙）2013-0184。动物饲养条件：温度（25±1）℃，相对湿度50%～70%。

1.2 试剂与药品

GLP，纯度>95%杭州众芝康菇生物技术有限公司（Johncan International），批号：GK221020。

1.3 方法

1.3.1 动物造模及给药  适应性喂养2周后，32只小鼠给予高糖高热量饲料，另8只小鼠，作为正常组，给予普通饲料喂养。1……