蔡幸哲 彭林 刘珂芮 刘书亮 李诚 刘爱平

摘要：根据沙门氏菌噬菌体Lumpael的全基因组序列，预测该噬菌体裂解酶基因并对其进行生物信息学分析;优化其在大肠杆菌表达系统中的表达，并分析噬菌体裂解酶LysLorf22与外膜渗透剂最优组合的溶菌效果。结果表明，裂解酶LysLorf22的相对分子质量为1.76×104，等电点为9.14，其较优表达条件为：表达菌株Escherichia coli BL21，37 ℃诱导4 h。LysLorf22裂解谱较宽，最佳工作浓度为375 nmol/L，在30 min内可使氯仿处理的Salmonella Enteritidis ATCC 13076菌悬液OD600下降0.72;375 nmol/L的LysLorf22与0.5 mmol/L乙二胺四乙酸二钠联用对Salmonella Enteritidis ATCC 13076溶菌效果最佳，在2 h内可使活菌数从1.62×109CFU/ml下降至4.31×108CFU/ml。

关键词：沙门氏菌;噬菌体;裂解酶;外膜渗透剂

中图分类号：TS207.7文献标识码：A文章编号：1000-4440（2020）01-0212-07

Abstract：In this study， the gene encoding endolysin was predicted and analyzed by bioinformatic software based on the genomic sequence of Salmonella bacteriophage Lumpael. Besides， the expression of LysLorf22 in Escherichia coli expression system was optimized， and the bactericidal effect of LysLorf22 combined with outer membrane permeabilizing agents was analyzed. The results showed that the molecular weight of LysLorf22 was 1.76×104， and the isoelectric point was 9.14. The optimal expression condition of LysLorf22 was using expression strain Escherichia coli BL21， induced at 37 ℃ for four hours. LysLorf22 had a broad lytic spectrum， and its optimal working concentration was 375 nmol/L， in which the OD600 of chloroform-treated Salmonella Enteritidis ATCC 13076 could be reduced by 0.72 in 30 minutes. The combination of 375 nmol/L LysLorf22 and 0.5 mmol/L disodium ethylenediamine tetraacetate showed the best lytic effect on Salmonella Enteritidis ATCC 13076， which reduced the viable cells from 1.62×109CFU/ml to 4.31×108CFU/ml in two hours.

Key words：Salmonella;bacteriophage;endolysin;outer membrane permeabilizing agent

沙門氏菌是一种常见的人兽共患病原菌，主要通过蛋、肉等禽类产品感染人类[1]。人感染沙门氏菌后多出现剧烈头痛、发热、急性胃肠炎、呕吐等症状[2-3]。在世界各国各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌食物中毒占比较高。抗生素在沙门氏菌的预防和治疗中发挥着重要作用，近年来，由于抗生素的滥用，细菌耐药性不断增强，沙门氏菌多重耐药菌株也不断出现。2017年CHINET中国细菌耐药监测结果显示，沙门氏菌属细菌超过50%对氨苄西林产生耐药性，伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌对环丙沙星和氯霉素的耐药力较高[4-6]。沙门氏菌感染的控制面临极大挑战，亟待找到一种新型杀菌剂代替抗生素。

噬菌体在自然界中分布广泛，1958年Jacob等发现噬菌体编码的一类蛋白质具有裂解细菌的作用，将其纯化后命名为裂解酶[7]。……