郭俐麟

福莫特罗的（R，R）构型药理活性是（S，S）构型的1 000倍，并显示出较少的毒性，单独使用其支气管舒张作用是外消旋体活性的两倍。因此，单独使用（R，R）-福莫特罗即阿福特罗不仅可以增强作用活性，降低使用剂量，而且还可以减少毒副作用的发生。（R，R）-酒石酸福模特罗为高效的用于慢性阻塞性肺病的药物，能显著改善哮喘病人的发病［1-5］。本实验室在（R，R）-酒石酸福莫特罗原料药的生产过程中使用了甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯等有机溶剂，为了有效的控制产品质量和保证用药安全，有必要测定药物中有机溶剂残留是否符合药典要求，部分文献报道了富马酸福莫特罗有机溶剂残留［6-7］，而有关酒石酸福莫特罗原料药的有机溶剂残留却未见报道。本研究于2017年1月至2018年5月采用顶空毛细管气相色谱法［8-21］检查（R，R）-酒石酸福莫特罗中7 种有机溶剂残留量，方法准确可靠。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 安捷伦7890A气相色谱仪，安捷伦G1888 顶空进样器。甲醇、乙醇、异丙醇为色谱级，二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为分析纯。（R，R）-酒石酸福莫特罗样品为自制（批号20101118、20101119、20101120）。

1.2 色谱条件 HP-5 毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；载气为氮气，流速1.0 mL/min；进样口温度为200 ℃，分流比为1∶1；程序升温，40 ℃下保持8 min，然后以8 ℃/min 的速率升到120 ℃保持5 min。检测器温度为250 ℃，氢气流速30 mL/min，空气流速300 mL/min，尾吹25 mL/min；进样体积1 mL。安捷伦G1888顶空进样器，顶空瓶加热温度为100 ℃，定量环110 ℃，传输线120 ℃，顶空瓶加热时间30 min，加压时间0.2 min，定量环填充时间0.2 min，定量环平衡时间0.05 min，进样时间1.0 min，顶空瓶体积20 mL。

1.3 对照品溶液的配制 精密称取甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯适量置50 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，制成每1毫升中含甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯分别为120、200、200、26、200、30、36 μg 的对照品溶液。

1.4 供试品溶液的配制 精密称取供试品（R，R）-酒石酸福莫特罗200 mg，置20 mL 顶空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解即得供试品溶液。

2 结果

2.1 系统专属性试验 分别取甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯及DMF 适量，在信噪比≥3条件下，取样5 mL，顶空进样分析，结果见图1。出峰顺序甲醇（2.636）、乙醇（2.756）、异丙醇（2.877）、二氯甲烷（3.040）、乙酸乙酯（3.621）、四氢呋喃（3.804）、甲苯（6.942）、DMF（8.207）。7 种有机溶剂之间的分离度均大于2，理论塔板数均大于10 000，对称性好。

2.2 线性与范围 分别吸取对照品储备液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于25 mL 量瓶中，用DMF 稀释至刻度，配成7 个线性浓度（1、2、3、4、5、6、7）。分别吸取各线性下溶液5.0 mL于20 mL 的顶空瓶中，密封，分别进样分析，测定结果见表1。结果表明乙醇、异丙醇、乙酸乙酯在40.00～400.00 μg/mL 范围内；甲醇在60.00～240.00 μg/mL 范围内；二氯甲烷在4.80～48.00 μg/mL 范围内；四氢呋喃在5.76～57.60 μg/mL 范围内；甲苯在7.12～71.20 μg/mL范围内，线性关系良好。

表1 线性关系测定结果

2.3 精密度试验 按“1.3”项下配制对照品溶液，分别吸取5 mL于20 mL顶空瓶中，密封。依次进样分析，测定结果见表2。结果表明甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯6次进样的峰面积相对标准偏差（RSD）分别为1.55%、1.76%、2.05%、3.66%、1.85%、1.98%、1.57%。数据显示精密度较好。

表2 精密度试验结果

2.4 回收率试验 精密称取供试品（R，R）-酒石酸福莫特罗2份，每份200 mg，分别置于20 mL顶空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解，作为空白。另外精密称取供试品（R，R）-酒石酸福莫特罗9 份，每份200 mg，每3份一组，每组分别加线性3、4、5溶液5.0 mL，密封，使之溶解。依次测定，测定结果扣除空白后，计算回收率。结果见表3。

表3 回收率测定结果/%

2.5 定量限和检测限的测定 分别单独配置7 种待测有机溶剂溶液，用DMF适当稀释直到待测有机溶剂的色谱峰峰高是基线噪声的10 倍，作为定量限，将达定量限的溶液进一步稀释到待测有机溶剂的色谱峰峰高是基线噪声的3 倍，作为检测限。结果显示，当信噪比约为10时，7种有机溶液浓度分别为：甲醇55.73 μg/mL，乙醇33.98 μg/mL，异丙醇20.50 μg/mL，二氯甲烷2.41 μg/mL，乙酸乙酯35.59 μg/mL，四氢呋喃2.92 μg/mL，甲苯6.58 μg/mL。当信噪比约为3 时，7 种有机溶液浓度分别为：甲醇15.22 μg/mL，乙醇10.14 μg/mL，异丙醇7.29 μg/mL，二氯甲烷0.72 μg/mL，乙酸乙酯10.64 μg/mL，四氢呋喃0.88 μg/mL，甲苯1.98 μg/mL。

2.6 稳定性的考察 精密称取供试品（R，R）-酒石酸福莫特罗200 mg，置20 mL 顶空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，溶解，于室温下分别放置0、1、2、4、6 h，照色谱条件进行测定，均未测出7 种有机溶剂残留。结果表明，本方法用于测定（R，R）-酒石酸福莫特罗中残留有机溶液，数据可靠。

2.7 耐用性的考察 考查载气流速（0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min）、进样口温度（195 ℃、200 ℃、205 ℃）、检测器温度（245 ℃、250 ℃、255 ℃），在不同条件下测得RSD 分别为1.3%、1.9%、1.0%，均未大于2.0%，该方法耐用性良好。

2.8 （R，R）-酒石酸福莫特罗有机溶剂残留测定按照1.3和1.4的方法配置精制对照品及3批样品，照色谱法进行测定，精制对照品与3批样品均未检出7种残留有机溶剂，符合人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）的有机溶剂残留量研究指导原则标准。

3 讨论

3.1 柱温的选择 本实验中7 种待测溶剂在柱温达到40 ℃时能达到基线分离，但因DMF 的沸点比较高，保留时间比其他溶剂长。故在本实验中采取了程序升温的方式加快DMF被载气带出，从而使实验时间缩短。

3.2 溶剂的选择 本实验尝试水作为溶剂，但峰形存在拖尾现象，后采用了DMF，峰形明显得到改善，分离度良好。

3.3 色谱柱的选择 在前期实验中，比较了不同极性的色谱柱，如HP-5、DM-624，四氢呋喃与乙酸乙酯在DM-624毛细管柱上未达到基线分离，最终选择了能有效分离并测定7种有机溶剂的HP-5色谱柱。

本研究建立了顶空毛细管气相色谱法测定（R，R）-酒石酸福莫特罗中有机溶剂残留量的方法，并对三批样品进行了有机溶剂残留的测定。该方法灵敏、准确、快捷，经方法学验证，该方法的专属性、检测限、线性与范围、精密度、回收率等均满足药物质量控制的方法学要求，所建立的方法能够对（R，R）-酒石酸福莫特罗中有机溶剂残留量进行有效的测定。可为该产品后续的研发等工作提供很好的参考，可作为质量控制的方法，为其他类药物的有机溶剂残留的检测工作提供参考，具有一定实用性。