刘晓东,连世存,刘丰波,马振乾,刘红详,董雅琴,高 丰 (1.吉林大学 动物医学学院,吉林长春1006;.西安市动物卫生监督所,陕西 西安710061;.青岛易邦生物工程有限公司,山东 青岛66000;4.中国动物卫生与流行病学中心,山东 青岛66000)

猪繁殖与呼吸道综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪场危害较重的传染病之一,多在夏秋季发生[1],猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分为美洲型毒株和欧洲型毒株,很多学者研究表明:迄今为止我国各地分离的毒株均为美洲型毒株[2-3],主要表现为传播途径广、病死率高、致病力强、仔猪与育肥猪极其易感[4-6],严重影响我国养猪业生产成绩[6]。因此,对猪群PRRS抗体水平检测已经成为现阶段猪场科学养殖的重要手段,并可为猪场的PRRS免疫水平,PRRS疾病防控以及PRRS的风险评估提供有力的参考数据。

1 材料与方法

1.1 被检猪血清样品2015年598个猪场,13 754个血清;2016年754个猪场,21 866个血清;2017年660个场,14 160个血清。不同阶段猪群分为种猪、哺乳仔猪、保育猪、育肥猪等。按照常规实验室方法,分离血清,分离的血清－20℃保存备用。

1.2 试剂和仪器PRRS ELISA 诊断试剂盒购自美国IDEXX 公司,包括ELISA 反应板、洗涤液(10×)、阴性对照、阳性对照、样品稀释液TMB 底物、终止液等。

酶标仪(型号为TECAN),购自瑞士帝肯公司;离心机(型号为TGL-16),购自湘仪公司;微量移液器、枪头、超净台等由本实验室提供。

1.3 PRRSV抗体检测应用ELISA 进行检测,在使用时,所有的试剂盒组分都必须恢复到室温18～25℃,使用前应将各组分放置于室温至少1 h。

1.4 数据处理与分析检测结果,应用Excel 2013进行统计学分析处理。

2 结果

2.1 调查猪场数量及区域分布2015－2017年共计调查猪场2 012个,其中2015年占29.7%,2016年占37.5%,2017年占32.8%(表1)。

表1 国内调查猪场数量区域分布 个

2.2 调查国内各区域样品PRRSV抗体监测结果2015－2017年PRRSV 抗体监测结果显示:2017年为81.3%,是3年内最高值;2015年为75.6%,是3年内最低值;2015 年以西北地区抗体阳性率最高79.9%,西 南 地 区 最 低68.3%;2016 年 抗 体 阳 性 率以华东地区最高81.9%,华北地区最低73.3%;2017年抗体阳性率以华东地区最高87.6%;华北地区最低78.0%(表2)。

表2 调查国内各区域猪场样品PRRSV 抗体阳性率监测结果 %

2.3 调查猪场不同季度样品PRRSV 抗体监测结果

对不同季度PRRSV 抗体检测调查结果显示:2015年第1季度平均阳性率74.7%;第2季度平均阳性率77.9%;第3季度平均阳性率68.6%;第4季度平均阳性率81.3%。2016年第1季度平均阳性率71.6%;第2季度平均阳性率81.3%;第3季度平均阳性率73.1%;第4 季度平均阳性率80.1%。2017年第1季度平均阳性率76.3%;第2季度平均阳性率84.9%;第3季度平均阳性率78.5%;第4季度平均阳性率85.6%(表3)。

表3 调查猪场不同季度PRRSV 样品抗体监测结果 %

2.4 调查猪场不同生产阶段样品PRRSV 抗体监测结果2015年种猪PRRSV 抗体阳性率83.74%,育肥猪76.45%;保育猪群最低70.12%;仔猪72.23%。2016年种PRRSV 抗体阳性率84.21%,育肥猪82.11%;保 育 猪 群 最 低68.53%;仔 猪71.34%。2017年种猪PRRSV 抗体阳性率87.62%,育肥猪90.42%;保育猪78.82%;仔猪最低68.31%。2015年与2016年各阶段猪群PRRSV 抗体阳性率均以种猪群最高,保育猪最低。2017 年则是育肥猪最高,仔猪最低。

在2015－2017年间,采集样品PRRSV 抗体平均S/P值2015年种猪1.87;育肥猪1.82;保育猪1.67;仔猪0.93。2016年种猪1.75;育肥猪1.86;保育猪1.46;仔 猪1.13。2017 年种 猪1.57;育肥猪1.91;保育猪1.52;仔猪1.20。

对2015－2017 年所采集样品PRRSV 抗体离散度显示:2015年各阶段离散度种猪59%;育肥猪57%;保育猪78%;仔猪69%。2016年各阶段离散度种猪58%;育肥猪76%;保育猪56%;仔猪76%。2017年各阶段离散度种猪62%;育肥猪52%;保育猪69%;仔猪86%(表4)。

表4 调查猪场不同生产阶段样品PRRSV 抗体监测结果

2.5 不同分布区间PRRSV 抗体比例对2015－2017年不同分布区间PRRSV 抗体比例显示:PRRSS/P值主要分布于:0.4～2.0区间内,但小于0.4的区间比例次之,大于3.5区间比例最小。2015年PRRSV 抗体即S/P值区间小于0.4中保育猪比例最高29.9%,2016年S/P值区间小于0.4中哺乳仔猪最高28.7%;2017年S/P值区间小于0.4中哺乳仔猪最高31.7%。2015－2017年S/P值区间大于3.5 的比例均为0.2%～4.1%。

3 讨论

3.1 不同猪场分布情况及猪场规模分布分析对2015－2017年PRRSV 抗体不同地区及猪场规模调查分析显示:华东、华南与华中的猪场检测数较其他地区都要高,这可能与当地的养殖水平及养殖观念有关,相较于东北及西北地区,华东、华南及华中地区的经济发达,养殖意识,对科学养殖及猪场常规检测观念接受能力强。

3.2 不同空间、不同时间PRRSV 抗体监测分析对2015－2017年不同区域PRRSV 抗体监测结果显示:2015－2017 年抗体平均抗体阳性率逐年升高,由2015年的75.6%逐步升至2017年的81.3%,由此我们可以推测随着养殖场对PRRSV 的重视,我国整体对其的防控水平也在逐年提高。

对不同地区2015－2017 年PRRSV 抗体阳性率调查我们可以看出:华东地区抗体阳性率最高,其次为华南,西南地区最低74.1%。但全国地区整体抗体水平差异不大均在74.1%～82.9%之间。由此我们可以推断我国各地区整体PRRSV 的防疫都较为重视,全国各地的防疫水平较好,这也可能是自2008年后我国再没有出现大规模的PRRSV 疾病的发生重要原因之一。

根据疾病的不同季度发病规律研究调查结果显示:2015－2017 年4 个季度抗体阳性率平均在73.4%～82.3%之间,第4季度最高;第3季度最低。第4与第1季度抗体阳性率较其他2季度较高,第3与第1季度为每年防疫的防疫重点时间,由此我们推断这与第2与第4季度抗体平均水平较高有关。

3.3 猪群不同阶段PRRSV抗体检测调查结果分析

对2015－2017年各阶段猪群PRRSV 抗体阳性率调查中我们发现:2015－2016 年均以种猪群最高,保育猪最低。2017年则是育肥猪最高,仔猪最低。2015－2016年种猪群抗体最高原因主要是猪场对母猪的免疫都比较重视。其抗体水平随疫苗免疫次数的增加而提高。因PRRS的免疫往往在14～21日龄,会干扰母源抗体同时对保育猪抗体造成一定影响,因此保育猪抗体较低。从现场生产中我们也会发现,猪病控制的关键环节就是在保育阶段初期,这个阶段的仔猪因为逐渐失去母源抗体的保护而变得极为易感,在保育前后进行检测跟踪对疾病的防疫具有非常大的意义。2017 年的对不同猪群PRRSV 抗体检测结果发现育肥猪抗体最高,仔猪最低,育肥猪抗体阳性率最高,仔猪最低,我们推测与2017年很多规模场对种猪群进行了免疫次数减少有关,也正是母猪免疫次数减少造成哺乳仔猪的抗体阳性率在2017年是2015－2017年期间最低水平,2017年各阶段PRRSV 抗体阳性率的变化要引起我们的重视。

2015－2017年不同阶段抗体水平中:以种猪与育肥猪抗体水平较高,推断其原因:种猪经多次免疫,对免疫系统不断刺激保证了种猪抗体一直保持在高水平上,育肥猪抗体水平也较高则是因为保育阶段接受免疫刺激及一些外界应激刺激,抗体有一定调整但至育肥时,猪体免疫免疫系统完善,体况强壮抗体又重新升高,此结果与宋建国等[7-8]报道的结果相一致。但各阶段猪群离散度都较大,推测此与现在养殖场内还是存在很多隐性感染猪群有关。

3.4 PRRSV 抗体在不同区间比例分析通过对2015－2017年不同分布区间PRRSV 抗体比例显示:S/P值区间主要分布于:0.4～2.0区间内,S/P值区间大于3.5 的比例均低于5%。这说明我国PRRSV 在2015－2017年间整体稳定,没有出现大规模的暴发,同时也说明猪场的生产基本趋于平稳,没有因PRRSV 造成大规模生产不稳定。但要引起我们警惕的是小于0.4的区间比例较高,2015年S/P值区间小于0.4 中保育猪 比例最 高为29.9%,2016年S/P值区间小于0.4 中哺乳仔猪最高为28.7%;2017年S/P值区间小于0.4中哺乳仔猪最高为31.7%,由此我们推断这些抗体阴性猪是最容易引起野毒感染的潜在危险,我们要持续定期检查尽最大努力将阴性猪群的抗体提至可保护水平,以保证猪群健康稳定的生产。

本研究对2015－2017 年PRRSV 抗体调查显示国内PRRSV 整体防疫水平较为理想,能够有效的保护猪场安全。此疾病在2015－2017年间只是存在隐性感染及点状散发现,近年各地区越来越重视PRRSV 抗体检测,通过检测来提前发现问题,做好预警[9-17]。因此,在现实生产中一定要重视PRRSV 抗体检测、饲养管理及生物安全措施才能更有效的减少PRRSV 的发生,让我们的养殖企业获得最大收益。