刘雅丽 荣玉静 胡深强 李亮 刘贺贺 何桦 夏露 胡继伟 胡博 王继文

摘要：为了揭示miR-199a-5p在鹅卵泡颗粒细胞凋亡中的作用及调控机制，本研究分离培养鹅等级卵泡颗粒细胞并转染miR-199a-5p相似物（mimic）和抑制物（inhibitor），采用qPCR法检测细胞凋亡相关基因的mRNA表达量;为进一步探究其作用机制，结合RNAhybrid和Targetscan 7.0预测miR-199a-5p靶基因，然后在中国仓鼠卵巢细胞系（CHO）中采用双荧光素酶报告系统检测miR-199a-5p对血管生成因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）3′UTR荧光素酶活性的影响，最后采用qPCR检测miR-199a-5p对鹅颗粒细胞VEGFA表达量的影响。结果显示，过表达miR-199a-5p能顯著升高BCL2/BAX比值（P<0.05），显著下调Caspase3 mRNA表达量（P<0.05）;抑制miR-199a-5p则显著下调BCL2/BAX值（P<0.05），对Caspase3 mRNA表达量无影响（P>0.05）。双荧光素酶报告载体系统发现，miR-199a-5p能极显著抑制VEGFA-WT报告载体荧光素酶活性（P<0.01），但对VEGFA mRNA表达量无显著性影响（P>0.05）。上述试验结果表明，miR-199a-5p可能通过抑制BAX和Caspase3表达量来抑制鹅颗粒细胞凋亡，但在鹅颗粒细胞中miR-199a-5p是否通过VEGFA调控细胞凋亡需要进一步研究。

关键词：miR-199a-5p;VEGFA;颗粒细胞凋亡;鹅;mimic;inhibitor

中图分类号：S858.33  文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2020）23-0060-06

卵巢卵泡发育状况影响家禽繁殖性能和产蛋率，而影响卵泡正常发育的因素众多，其中颗粒细胞增殖分化或凋亡对卵泡发育具有重要作用[1]。颗粒细胞能合成多种活性肽，不仅可以调节垂体释放促卵泡素（FSH）影响卵泡发育，还能作为局部调节因子调控类固醇激素生成和细胞增殖，为卵泡生长发育所必需。禽类卵泡发育过程中大量发生闭锁，这个过程主要受颗粒细胞凋亡率调控。Johnson等发现，鸡卵泡闭锁起始于颗粒层并受颗粒细胞凋亡过程的调节[2-3]。

miRNA是一类长约18～25 nt具有调控功能的内源性非编码蛋白RNA[4]。目前在颗粒细胞中已经发现许多miRNA参与调控细胞增殖凋亡。……