穆清爽 古力鲜·马合木提 努尔阿米娜·铁力瓦尔地 黎 静

新疆医科大学第二附属医院呼吸科，新疆乌鲁木齐 830063

支气管哮喘是由多种细胞、炎性因子及生长因子参与的慢性炎症性疾病，我国支气管哮喘的发病率呈逐年上升趋势，严重危害患者的健康及生活质量[1-2]。支气管哮喘的表型可根据主要参与的炎症细胞类型进行分类，即嗜酸性粒细胞表型组和中性粒细胞表型组[3]。不同细胞表型的支气管哮喘患者的疾病特点、治疗方式及预后均有所差异，针对两种表型的不同免疫反应、临床特点进行深入研究，有助于临床对支气管哮喘患者进行更为精准的诊断及治疗。表皮生长因子（EGF）是一种由53 个氨基酸残基组成的活性多肽，与表皮生长因子受体（EGFR）结合后，可通过胞内激酶区自身磷酸化调控相关基因表达。而血管内皮生长因子（VEGF）是一种由二硫键交联形成的糖蛋白二聚体，主要来源为外周嗜酸性粒细胞、气道上皮细胞和平滑肌细胞等。既往研究显示[4-6]，EGF、VEGF 在支气管哮喘患者疾病进程中的气道炎症改变、高敏反应及气道重塑中可能起到了重要的作用，可促进表皮细胞和纤维母细胞、炎症细胞的化学趋向移动、分化、增殖，在维护上皮组织完整、促进创伤愈合、细胞增殖分化、细胞周期运转和细胞生存均起着重要作用。但在不同表型支气管哮喘患者中的差异性仍需进一步研究，同时能够指导临床完善不同表型支气管哮喘的诊治流程。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年8 月～2018 年12 月就诊于新疆医科大学第二附属医院的急性支气管哮喘患者90 例为研究对象。纳入标准：①所有患者均符合2016 年中华医学会呼吸病学分会哮喘组制订的《支气管哮喘防治指南》[7]；②年龄25～74 岁；③处于急性发作期，入院后经过规范化治疗，治疗原则参考2016 版《支气管哮喘防治指南》[7]。排除标准：①合并慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺结核等其他肺部疾病；②存在心、肝、肾等重要脏器的严重疾病；③合并恶性肿瘤、自身免疫疾病；④妊娠及哺乳期妇女。根据诱导痰细胞分型[8]将研究对象分为中性粒细胞表型组（中性粒细胞≥61%，24 例）和嗜酸性粒细胞表型组（嗜酸粒细胞≥3%，66 例）。

1.2 肺功能测定

采用BTL-08（SpiroBTL Industries Limited）肺功能测量仪测量所有患者第1 秒用力肺活量（FEV1）、FEV1/用力呼气体积（FVC）、第1 秒用力呼气容积占预计值的百分比（FEV1%pred）。所有受试者均行肺功能检查后FEV1%pred＞65%，进行下一步痰诱导。

1.3 痰液及血清标本的采集及检测

所有患者均参照欧洲呼吸协会诱导痰液指导小组的指南进行诱导痰技术[9]：晨起禁食，吸入沙丁胺醇气雾剂（上海信谊药厂有限公司，批号：20161124）200 μg 后吸入超声雾化4.5%高渗盐水20 min。并鼓励患者咳嗽，对咳出的痰液进行收集。痰诱导过程中如出现呼吸困难等症状立即停止痰诱导。痰液标本均在2 h 内进行处理，采用4 倍体积于痰液标本的0.1%二硫苏糖醇（Genview，批号：20170219）对痰液进行液化，摇匀后置于37℃水浴孵育15 min，震荡离心后取沉淀细胞，计数细胞总数。对沉淀涂片进行苏木精-伊红（HE）染色，计算嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数和百分比。同时将痰液标本上清置于-80℃保存待检。所有患者于清晨空腹抽取静脉血2 mL，1000 r/min，离心10 min，离心半径为10 cm，收集上清液于-80℃保存待检。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测痰液上清液及血清中EGF、VEGF 的水平，所有操作流程均严格依照试剂盒（北京雅安达生物技术有限公司，批号：20161229）说明操作，检测仪器为贝克曼库尔特AU5800 全自动生化分析仪。采用免疫比浊法测量IgE，检测仪器为贝克曼库尔特自动免疫化学分析仪IMMAGE 800。血细胞分析仪进行血清嗜酸性粒细胞（EOS）百分比检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 对所得数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（）表示，采用t 检验。计数资料以例数表示，采用χ2检验。采用Pearson 检验进行相关性分析。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者基线资料比较

中性粒细胞表型组EOS 显著低于嗜酸性粒细胞表型组，差异有统计学意义（P ＜0.05）；而年龄、性别、血清IgE 水平、FEV1%pred 在两组患者中差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表1。

表1 两组患者基线资料比较（）

表1 两组患者基线资料比较（）

注：EOS：血清嗜酸性粒细胞；IgE：血清免疫球蛋白E；FEV1%pred：第1 秒用力呼气容积占预计值百分比

2.2 两组患者血清EGF、VEGF 水平比较

嗜酸性粒细胞表型组血清EGF、VEGF 水平显著高于中性粒细胞表型组，差异均有统计学意义（均P ＜0.05）。见表2。

表2 两组患者血清EGF、VEGF 水平比较（ng/L，）

表2 两组患者血清EGF、VEGF 水平比较（ng/L，）

注：EGF：表皮生长因子；VEGF：血管内皮生长因子

2.3 两组患者诱导痰EGF、VEGF 水平比较

嗜酸性粒细胞表型组诱导痰EGF、VEGF 水平显著高于中性粒细胞表型组，差异均有统计学意义（均P ＜0.05）。见表3。

表3 两组患者诱导痰EGF、VEGF 水平比较（ng/L，）

表3 两组患者诱导痰EGF、VEGF 水平比较（ng/L，）

注：EGF：表皮生长因子；VEGF：血管内皮生长因子

2.4 血清EOS 与EGF、VEGF 相关性分析

血清EOS 与血清EGF、VEGF 均呈正相关（r=0.513，P=0.032；r=0.397，P=0.031），与诱导痰EGF、VEGF 水平呈正相关（r=0.378，P=0.005；r=0.528，P=0.000）。

3 讨论

支气管哮喘的发生和发展可能受到遗传、环境、免疫、生活方式等多种因素影响[10]，根据炎症类型通常可被分为嗜酸性粒细胞表型和中性粒细胞表型。嗜酸粒细胞表型哮喘被认为是哮喘的一种重要亚型，可能与哮喘的严重程度、迟发性疾病和糖皮质激素敏感相关[11-12]。嗜酸性粒细胞表型哮喘与变应性致敏及Th2 细胞炎性反应有关[13]，致敏后的活化细胞进入气道，导致气道高反应的发生，提示哮喘病情的恶化。而中性粒细胞表型哮喘通常对糖皮质激素的反应效果较差，常常导致气道基底膜增厚，急性加重期气道分泌物中性粒细胞增多，痰中白细胞介素（IL）-8 水平升高[3,14]。中性粒细胞表型哮喘对糖皮质激素具有相对的抵抗力[15]。对于不同表型的支气管哮喘患者有效治疗手段具有一定差异[16]，诱导痰细胞计数是鉴别不同表型哮喘的“金标准”[11]。然而操作流程复杂，对肺功能较差的患者具有一定危险性，临床上迫切需要一种非侵入性、简便、快捷的方法进行分型。而既往研究[17]提示，生长因子在支气管哮喘的发生、发展中可能起着重要的作用，不同表型的支气管哮喘患者血清及诱导痰中生长因子可能存在一定差异。

EGF 是一种促生长细胞因子，而EGFR 是EGF细胞增殖、信号传导的受体，在气道上皮细胞、腺体及平滑肌组织中广泛表达。既往研究[18]已应用EGFR 抑制剂AG-1478 研究了EGF 及EGFR 在短期哮喘模型中的作用，AG-1478 治疗可降低气道高反应率、杯状细胞化生、气道胶原沉积和嗜酸性粒细胞流入。提示EGFR 信号在哮喘患者上皮细胞增生、杯状细胞化生、嗜酸性粒细胞聚集、平滑肌过度增殖中起到重要作用。本研究结果显示，EGF 在嗜酸性粒细胞表型哮喘组血清及诱导痰中显著高于中性粒细胞表型组，可能的机制为EGF 及EGFR 信号通路能够调控巨噬细胞极化，对嗜酸性粒细胞的趋化有一定的作用，但具体作用机制仍需进一步研究。嗜酸性粒细胞的显著升高通常提示自身免疫性疾病的发生[19]，EGF 在嗜酸性粒细胞表型组的过度表达则提示在这种气道炎性反应过程中发挥了重要的促进作用。由于嗜酸性粒细胞表型哮喘或者血清中EGF 显著升高，扩散至体液中，在诱导痰中同样表达升高。VEGF 是一种肝素结合蛋白，主要来源为外周嗜酸粒细胞、气道上皮细胞和平滑肌细胞等。既往研究报道[5]，VEGF 浓度升高是新生血管形成的生物标志物，提示可能与哮喘患者气道重塑和不可逆支气管收缩有关。本研究结果显示，VEGF在嗜酸性粒细胞表型哮喘组的血清及诱导痰中均显著高于中性粒细胞表型组，与既往研究结果相一致[20]，提示可能与外周血以及诱导痰中增高的嗜酸粒细胞及所致炎性反应密切相关。VEGF 可以上调Th2 细胞，而Th2 细胞主要参与嗜酸性粒细胞哮喘的免疫应答，诱导基质金属蛋白酶-9 的表达，趋化嗜酸性粒细胞，导致气道炎性反应。

相关性分析结果显示，EOS 与血清及诱导痰中EGF、VEGF 均呈正相关。提示EGF 及VEGF 可能与嗜酸性粒细胞所致的气道炎性反应增高相关，与病情严重程度具有一定相关，EGF 及VEGF 水平越高，病情可能越严重。此外，本研究对两组患者基线资料比较未见显著差异，排除了性别、年龄、肺功能及IgE 对EGF 和VEGF 的影响。然而，本研究尚未对正常人群和哮喘患者EGF、VEGF 的差异进行比较，拟进一步进行相关研究。

综上所述，嗜酸性粒细胞表型哮喘患者血清及诱导痰EGF、VEGF 水平显著高于中性粒细胞表型支气管哮喘患者，并且与血清EOS 水平有相关性。在临床中，对血清EGF 及VEGF 进行检测可简化支气管哮喘患者的分型及诊疗流程，并为不同表型支气管哮喘的治疗提供帮助。