王 陆，张红阳，史亚夫，李 敏，慕泽泾，钟国跃，朱继孝，王洪玲

（江西中医药大学中药资源与民族药研究中心，江西南昌 330004）

短穗兔耳草Lagotis brachystachysMaxim.为玄参科兔耳草属植物,用于治疗血热性化脓症、肺胃淤血、黄水病、脓疡等症状［1］；具有保肝［2-4］、降尿酸［5］、抑菌［6］作用,其化学类型主要有环烯醚萜［7-8］、黄酮［8-11］、苯丙素苷类［12］等。课题组前期从中分离得到17个化合物［8,12］,为了进一步研究短穗兔耳草的化学成分,本实验从中分离得到10个化合物,其中化合物4～8均为首次从该植物中分离得到的。

1 材料

Finnigan TSQ 700型质谱仪（美国Finnigan公司）；Bruker AX-600核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；CP-214电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；WB-2000型水浴锅、R-1001VN型旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；DZF-6050型真空干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）；岛津LC-20AT高效液相色谱仪 （日本岛津公司）；Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；YMC-pack ODS-A半制备柱（250 mm × 10 mm,5 μm,日本YMC公司）；200～300目硅胶（青岛海洋化工有限公司）；HSGF-254薄层层析硅胶板（烟台市化学工业研究所）。分析纯丙酮、甲醇、二氯、石油醚、乙酸乙酯等（西陇化工股份有限公司）；色谱纯甲醇、乙腈（美国天地有限公司）；超纯水（江西鼎技科学仪器有限公司）。

短穗兔耳草由江西中医药大学张亚梅副教授鉴定为玄参科植物短穗兔耳草Lagotis brachystachysMaxim.的干燥全草,样品保存在江西中医药大学中药资源与民族药研究中心。

2 提取与分离

将短穗兔耳草10.0 kg粉碎,用乙醇-水（75 ∶25）浸泡,得到4个部位。50% 乙醇部位（Fr3,110.0 g）经硅胶柱以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱,得7个组分Fr3-1～Fr3-7.Fr3-3 （30.45 g）经反复硅胶柱层析和凝胶色谱洗脱得组分Fr3-3-1-1～Fr3-3-1-8。将Fr3-3-1-2（35 mg）用半制备HPLC以甲醇-水（60 ∶40）洗脱得化合物1 （2 mg）、2 （3 mg）。Fr3-3-1-3 （128 mg）过Sephadex LH-20和半制备HPLC甲醇-水（60 ∶40）洗脱得化合物3 （3 mg）、4 （5 mg）。Fr3-3-1-5 （219 mg）过硅胶柱和Sephadex LH-20得化合物5 （4 mg）、6 （3 mg）。

90%乙醇部位（100.0 g）经硅胶柱以二氯甲烷-甲醇 （100 ∶5、100 ∶8、90 ∶10、85 ∶ 15、80 ∶20、75 ∶25、70 ∶30）洗脱,得6个组分Fr1～Fr6。Fr2 （9.3 g）经硅胶柱以石油醚-乙酸乙酯（90 ∶10、80 ∶20、75 ∶25、70 ∶30、50 ∶50）进行洗脱得Fr2-1～Fr2-13组分和化合物10 （1 g）。Fr2-9 （476.4 mg）经半制备HPLC甲醇-水（45 ∶55）得化合物7 （8 mg）、8 （140 mg）。Fr2-10（629.9 mg）经Sephadex LH-20和岛津半制备HPLC得化合物9 （12 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.73（1H,d,J=16.2 Hz,H-8′）,7.63 （2H,m,H-2″,6″）,7.41 （3H,m,H-3″,4″,5″）,6.58 （1H,d,J=16.2 Hz,H-7″）,6.31 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.07 （1H,m,H-4）,5.03 （1H,d,J=9.8 Hz,H-1）,4.77 （1H,d,J=7.8 Hz,H-1′）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：95.7 （C-1）,142.0 （C-3）,103.9 （C-4）,39.2 （C-5）,78.0 （C-6）,63.2 （C-7）,63.7 （C-8）,43.8 （C-9）,64.7（C-10）,168.6 （C-11）,100.4 （C-1′）,75.0 （C-2′）,79.6 （C-3′）,71.6 （C-4′）,78.0 （C-5′）,62.9 （C-6′）,135.9 （C-1″）,129.7 （C-2″,6″）,129.5 （C-3″,5″）,131.7 （C-4″）,146.8 （C-7″）,118.8 （C-8″）。以上数据与文献［13］基本一致,故鉴定为globularin。

化合物2：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.63（2H,m,H-2″,6″）,7.41 （3H,m,H-3″,4″,5″）,7.02 （1H,d,J=16.2 Hz,H-8′）,6.36 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.82 （1H,d,J=15.6 Hz,H-7″）,5.08 （1H,m,H-4）,5.03 （1H,d,J=9.6 Hz,H-1）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：95.6（C-1）,141.8 （C-3）,103.7 （C-4）,39.0 （C-5）,79.5 （C-6）,63.5 （C-7）,63.0 （C-8）,43.6 （C-9）,64.5 （C-10）,168.4 （C-11）,100.3 （C-1′）,74.8 （C-2′）,78.4 （C-3′）,71.5 （C-4′）,77.8 （C-5′）,62.8 （C-6′）,135.7 （C-1″）,131.6 （C-2″,6″）,129.3 （C-3″,5″）,130.0 （C-4″）,146.7 （C-7″）,118.6 （C-8″）。以上数据与文献［6］基本一致,故鉴定为globularicisin。

化合物3：白色粉末。ESI-MS m/z：491.2［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.88（2H,m,H-2″,6″）,7.82 （1H,d,J=15.6 Hz,H-8′）,7.58 （3H,m,H-3″,4″,5″）,6.79 （1H,d,J=16.2 Hz,H-7″）,6.54 （1H,dd,J=6.0,1.8 Hz,H-3）,5.20 （1H,m,J=3.0 Hz,H-7）,5.16（1H,m,H-4）,5.12 （1H,d,J=9.7 Hz,H-1）,4.76 （1H,d,J=7.8 Hz,H-1′）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：93.7 （C-1）,140.5 （C-3）,103.2（C-4）,37.4 （C-5）,77.4 （C-6）,61.4 （C-7）,61.6 （C-8）,42.0 （C-9）,62.8 （C-10）,166.0 （C-11）,98.5 （C-1′）,73.4 （C-2′）,76.4 （C-3′）,70.2 （C-4′）,77.1 （C-5′）,61.8 （C-6′）,134.1（C-1″）,129.0 （C-2″,6″）,128.5 （C-3″,5″）,130.6 （C-4″）,144.6 （C-7″）,118.1 （C-8″）。以上数据与文献 ［14］基本一致,故鉴定为10-cinnamoylcatalpol。

化合物4：白色粉末。ESI-MS m/z：374.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.45（1H,brs,H-3）,5.73 （1H,br s,H-7）,5.09（1H,d,J=7.6 Hz,H-1）,4.65 （1H,d,J=7.7 Hz,H-1′）,4.25 （1H,d,J=14.4 Hz,H-10b）,4.14 （1H,d,J=14.4 Hz,H-10a）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：98.1 （C-1）,153.2 （C-3）,112.6 （C-4）,36.5 （C-5）,39.5 （C-6）,128.3 （C-7）,144.6 （C-8）,46.8 （C-9）,61.3 （C-10）,171.0 （C-11）,100.1 （C-1′）,74.6 （C-2′）,77.6（C-3′）,71.3 （C-4′）,78.1 （C-5′）,62.4 （C-6′）。以上数据与文献［15］基本一致,故鉴定为京尼平苷酸。

化合物5：白色粉末。ESI-MS m/z：390.3［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.70（2H,m,H-3,6）,7.66 （2H,m,H-4,5）,4.19（4H,m,H-1′,1″）,1.62 （2H,m,H-2′,2″）,1.33 （4H,m,H-7′,7″）,1.27 （4H,m,H-3′,3″）,1.25 （8H,m,H-4′,5′,4″,5″）,0.86 （6H,m,H-8′,8″）,0.83 （6H,m,H-6′,6″）；13C-NMR（150 MHz,DMSO） δ：131.9 （C-1,2）,127.4 （C-3,6）,129.0 （C-4,5）,167.8 （C-7,8）,67.4 （C-1′）,38.3 （C-2′）,30.0 （C-3′）,28.6 （C-4′）,23.5 （C-1″）,11.0 （C-2″）,22.6 （C-5′）,14.1 （C-6′）。以上数据与文献［16］基本一致,故鉴定为bis （2-ethylhexyl）phthalate。

化合物6：白色粉末。ESI-MS m/z：390.3［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：7.72（2H,m,H-4,5）,7.67 （2H,m,H-3,6）,4.13（4H,m,H-1′,1″）,1.67 （6H,s,-CH3）,1.24～1.35 （16H,m,H-3′,3″,4′,4″,5′,5″″,6′,6″）,0.92 （2H,d,J=7.2 Hz,H-2′,2″）,0.86 （6H,m,H-7′,7″）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：131.8（C-1,2）,131.6 （C-3,6）,128.7 （C-4,5）,167.0 （C-7,8）,67.4 （C-1′,1″）,38.1 （C-2′,2″）,23.3 （C-3′,3″）,29.8 （C-4′,4″）,28.4 （C-5′,5″）,24.8 （C-6′,6″）,13.9 （C-7′,7″）,10.8（C-2′,2″-CH3）。以上数据与文献［17］基本一致,故鉴定为1,2-benzenedicarboxylic acid bis（2S-methylheptyl）ester。

化合物7：无色粉末。ESI-MS m/z：167.0［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.54（2H,overlapped,H-2,6）,6.82 （1H,d,J=8.7 Hz,H-5）,3.87 （3H,s,-OCH3）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：123.0 （C-1）,113.7 （C-2）,152.7 （C-3）,148.6 （C-4）,115.8 （C-5）,125.3（C-6）,170.0 （-C=O）,56.4 （-OCH3）。以上数据与文献［18］基本一致,故鉴定为香草酸。

化合物8：无色粉末。ESI-MS m/z：137.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.00（2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5）,6.68 （2H,d,J=8.4 Hz,H-2,6）,3.66 （2H,t,J=7.3 Hz,H-8）,2.69（2H,t,J=7.3 Hz,H-7）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：130.9 （C-1）,130.8 （C-2,6）,156.7（C-4）,116.1 （C-3,5）,39.3 （C-7）,64.5 （C-8）。以上数据与文献［19］基本一致,故鉴定为4-羟基苯乙醇。

化合物9：无色粉末。ESI-MS m/z：135.1［M-H］-。1H-NMR （600 MHz,CD3OD） δ：7.86（2H,d,J=9.6 Hz,H-2,6）,6.82 （2H,d,J=9.6 Hz,H-3,5）,2.53 （3H,s,-CH3）；13C-NMR （150 MHz,CD3OD） δ：130.1 （C-1）,132.6 （C-2,6）,164.1 （C-4）,116.2 （C-3,5）,199.5 （C-7）,26.3（C-8）。以上数据与文献［20］基本一致,故鉴定为对羟基苯乙酮。

化合物10：白色粉末。ESI-MS m/z：577.8［M+H］+。1H-NMR （600 MHz,DMSO） δ：5.34（1H,m,H-6）,4.87 （1H,m,H-1′）,4.43 （2H,t,J=5.9 Hz,H-6′）,4.21 （1H,d,J=7.8 Hz,H-4′）,0.95 （3H,s,H-21）,0.89 （3H,d,J=6.4 Hz,H-4′）,0.83 （3H,m,H-29）,0.81 （3H,m,H-27）,0.64 （3H,m,H-18）；13C-NMR （150 MHz,DMSO） δ：37.3 （C-1）,25.8 （C-2）,77.3 （C-3）,38.7 （C-4）,140.9 （C-5）,121.7 （C-6）,31.9 （C-7）,31.8 （C-8）,50.0 （C-9）,36.7 （C-10）,21.0（C-11）,40.2 （C-12）,42.3 （C-13）,56.6 （C-14）,24.3 （C-15）,28.2 （C-16）,55.8 （C-17）,12.2 （C-18）,20.2 （C-19）,35.9 （C-20）,19.1（C-21）,29.7 （C-22）,33.8 （C-23）,46.6 （C-24）,29.1 （C-25）,19.4 （C-26）,19.6 （C-27）,23.0 （C-28）,12.1 （C-29）,101.2 （C-1′）,73.9（C-2′）,77.3 （C-3′）,70.5 （C-4′）,77.2 （C-5′）,61.5 （C-6′）。以上数据与文献［21］基本一致,故鉴定为胡萝卜苷。

4 讨论

本研究从短穗兔耳草75% 乙醇提取物中分离鉴定10个化合物,主要涉及环烯醚萜、酚性及甾体类,进一步丰富了其化合物的数量。本课题前期研究发现短穗兔耳草具有降尿酸作用［2］,从中发现2个抑制黄嘌呤氧化酶活性的化合物［12］,而酚类化合物具有降尿酸的功效［22-23］,环烯醚萜苷化合物具有抗炎、抗癌、保肝利胆等功效［24］,下一步将继续对短穗兔耳草分离得到的单体化合物进行活性筛选,以期为其后期开发及利用提供参考。