李秋鸿，黄清松，毛建文

(广东药科大学生命科学与生物制药学院/广东省生物活性药物研究重点实验室，广东 广州 510006)

人胚胎干细胞(hESCs)来源于人囊胚内细胞团，在体外培养时具有自我更新和多向分化的潜能，其体外分化的过程可再现早期胚胎发育的各个阶段[1-3]。定型内胚层细胞是包括甲状腺、肺、胰腺、肝脏和肠道在内等器官的胚胎前体[4]。不管是脊椎动物的体内胚胎发育还是人多能干细胞的体外定向分化，定型内胚层的产生都必须依赖于TGF-β/nodal/activin信号通路的激活[5]。该信号通路的激活往往伴随着细胞迁移运动的发生，细胞运动是一个非常复杂的过程，表现为细胞形态、黏附和迁移能力等方面的变化[6-9]。在体外，将人胚胎干细胞定向分化为定型内胚层[10]或中胚层[11]的过程中都可以检测出与细胞运动有关的表面蛋白表达发生变化，例如E-cadherin、N-cadherin等。在胚胎发育过程中，锌指蛋白SNAIL家族的激活能够促进细胞发生迁移运动[12]，体外定型内胚层细胞运动能力的获得与SNAIL家族之间的关系目前报道较少。为了研究SNAIL家族在定型内胚层分化过程中的作用，本实验通过干扰SNAI1基因的表达，探讨SNAI1与定型内胚层命运及与细胞运动之间的关系。

1 材料

1.1 细胞

人胚胎干细胞细胞株H1购于威斯康星州WiCell研究所(Wicell,Madison,WI)。

1.2 主要试剂

mTeSR1培养基(Stemcell Technologies)；Matrigel基底胶(BD Biosciences)；Accutase细胞消化液(Sigma)；RPMI/B27培养基(Gibco)；激活素A(Peprotech)； FBS (HyClone)；DAPI(Sigma)；FOXA2抗体(R&D system)；小鼠来源的SNAI1单克隆抗体(Cell Signaling Technology)；HRP标记的羊抗兔二抗、Alexa Fluor®488 标记的驴抗羊二抗(Invitrogen)；Trizol试剂(MRC)；ReverTra Ace qPCR RT Kit (TOYOBO)；SYBR Premix Ex Taq Kit(TAKARA)；western化学显色试剂盒(MILLIPORE)；siSNAI1-1#(锐博生物)；siSNAI1-2#(锐博生物)；转染试剂Lipofectamine RNAiMAX(Thermo scientific)。……