桑 鹏， 王肇衿， 陈贵元， 杨力权

（1.大理大学农学与生物科学学院，云南大理671003；2.大理大学基础医学院，云南大理671000；3.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理671000）

蛋白酶在科学研究和工业生产等方面应用广泛（唐兵等，2000），其主要产自微生物，但在高温、强酸、强碱、多金属离子等条件下酶的催化活性并不好，常有失活情况发生（林影等，2000）。 高温蛋白酶的应用前景十分广阔（廉立慧等，2011），但国内对高温蛋白酶产生菌的研究相对较晚， 对高温蛋白酶催化活性方面的研究还鲜有报道。 本研究以云南大理弥渡县热泉土样为材料， 筛选出产高温蛋白酶的菌株， 对其分类鉴定并对其酶学性质进行研究， 旨在为发酵工业新备选产蛋白酶菌株的开发应用提供资源， 为进一步开发利用该菌株提供基础， 也为进一步获得产蛋白酶基因的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 土壤样品 土壤样品来自大理弥渡县白总旗热泉的底泥，热泉水温55 ℃。

1.1.2 主要仪器 显微镜（奥林巴斯）；紫外可见光分光光度计（上海菁华仪器公司）；高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器公司）；恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；水浴恒温摇床（常州国华电器有限公司）；高压蒸汽灭菌锅（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）；超净工作台（苏州净化设备有限公司）；PCR 扩增仪（美国ABI）；电泳仪（北京六一生物科技有限公司）。

1.1.3 试剂 酵母抽提物、蛋白胨为英国进口；琼脂粉为西班牙进口分装；脱脂奶粉、三氯乙酸、folin试剂、浓盐酸、干酪素、氯化钠、结晶紫、碘、乙醇、孔雀绿、番红等均为国产分析纯试剂。……