任亚锋 高姗姗

【摘 要】采用正交试验法对高山红景天的提取工艺进行设计，用高效液相色谱法测定提取物中红景天苷的含量。确认提取红景天中有效成分红景天苷的最佳工艺条件为：用70%的乙醇，料液比1：10，温度78℃，提取两次，提取时间分别为两小时和一小时。在此提取工艺下，采用微波加热法萃取快，收率高，是3种预处理方法中最好的方法，值得推广使用。

【关键词】红景天苷;正交试验;提取工艺;高效液相色谱法;萃取

一、儀器与试药

1.仪器：Agilent1100高效液相色谱仪、KQ-3200B型台式超声波清洗器（昆山市超声仪器厂）、SHB-B95型真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、HH-4恒温水浴锅（国华电器有限公司）、DZF-6050型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）、DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海益恒实验仪器有限公司）、RE52-98型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、FZ102型植物试样粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）、WD800G型微波炉（佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司）、TEM-200型超声波细胞破碎仪（北京天正通工贸有限公司）。

2.试药：红景天苷对照品（中国药品生物制品检定所）、甲醇为色谱纯（Merk公司生产）、乙醇为分析纯（西安化学试剂厂）、水为实验室自制。

3.材料：高山红景天药材购自于延边土特产品经销公司。

二、试验方法和结果

（一）优选红景天苷的最佳提取工艺

1.正交试验设计

采用正交试验法，选择乙醇浓度（40%、70%、95%）、料液比（1：10、1：20、1：30）、温度（40℃、60℃、78℃）、提取时间（1 h -1 h、1.5 h -2 h、2 h -1 h）作为考察的四个因素，各取三个水平，以红景天苷的含量作为考察指标，按照正交表进行实验。

2.正交试验方法

粉碎红景天，精密称取10.0g红景天粗粉18份，按实验设计方案分别加入不同比例的溶剂，以不同的提取时间及温度进行提取;随后将滤液旋转蒸发，残渣用甲醇洗涤数次，转移至25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取0.25mL样品溶液置于5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，并用0.45μm微孔滤膜过滤作为供试品溶液备用。

3.正交试验结果分析

从右表比较可知，最佳因素排列为：A2B1C3D3，即用70%的乙醇，料液比1：10，温度78℃，提取两次，提取时间分别为两小时和一小时。

（二）选择药材预处理方法

保持提取红景天苷最佳工艺条件不变，考察了3种药材预处理方法对提取红景天苷收率的影响。

1.纯化水浸泡时间对红景天苷收率的影响

在提取有效成分之前必须先将药材浸泡一段时间，使药材充分膨胀，以利于有效成分的浸出。实验将考察预处理过程中纯化水浸泡时间对红景天苷收率的影响，取5组分别浸泡2、4、6、8、10小时，取样检测计算出收率分别为1.4%、1.5%、1.52%、1.53%、1.52%。可见，水浸泡8h时，红景天苷收率达最大值，约1.53%，再延长浸泡时间，红景天苷收率反而下降。对于某些苷类而言，由于细胞内同时存在着与其相应的水解酶，随着浸泡时间过长，部分苷被水解。因此，如果选择纯化水浸泡法，则纯化水浸泡时间选择8h最适宜。

2.超声波振动时间对红景天苷收率的影响

采用不同超声波振动时间分别对样品进行预处理，考察超声波振动时间对红景天苷收率的影响。取5组分别用超声波振动3、6、9、12、15分钟，取样检测计算出收率分别为1.5%、1.52%、1.54%、1.542%、1.55%。可见，超声波对固体样品的预处理很有利，它不仅促进和加速萃取过程，而且还可避免高温对目标成分的破坏，操作方法简单，副产品少，目标产物易分离。超声波振动15min，红景天苷收率达1.55%，获得比常规提取法更理想的结果。

3.微波加热时间对红景天苷收率的影响

采用不同微波加热时间分别对样品进行预处理，考察微波加热时间对红景天苷收率的影响。取5组分别用微波加热10、15、20、25、30秒，取样检测计算出收率分别为1.51%、1.53%、1.54%、1.55%、1.56%。可见，使用微波加热，可以加快红景天苷的萃取速率，加热30s时，红景天苷收率达1.56%，是3种预处理方法中收率最高的方法。此技术应用于药材浸出是一种省时便捷、值得推广普及的中药浸出新方法。

三、结论

用正交试验法选出提取红景天有效成分红景天苷的最佳工艺，即用回流法提取，乙醇浓度为70%，料液比1：10，温度78℃，提取两次，提取时间分别为2小时和1小时。该工艺提取红景天中的红景天苷工艺简单、提取率高、操作控制容易、稳定性好，适用于工业化生产。

考察了3种预处理方法对红景天苷收率的影响。结果表明，微波加热预处理技术萃取速率快、收率高，加热30s收率达1.56%，是3种预处理方法中收率最高的方法。

参考文献：

[1]明海泉，夏光成.红景天研究进展[J].中藏药，2004，19（5）：37-41.

[2]顾艳丽.红景天提取工艺及其制剂研究[D].沈阳医科大学，2002.

[3]王洋，张璞，于涛.高效液相色谱法测定红景天苷含量方法的研究[J].植物研究，2001，21（1）：113-115.